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xiaoniu_e木蟲 (正式寫手)
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[求助]
請教液體培養(yǎng)基試管連續(xù)稀釋法的操作
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測試藥物的抗菌活性，用液體培養(yǎng)基試管連續(xù)稀釋法測MIC。 每個試管中，接種菌液量多少合適？ 我在網(wǎng)上搜，涉及到具體操作的不多，有一個有操作的寫的是“細(xì)菌檢測培養(yǎng)基通常采用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)，將約為104-105個/mL濃度的接種菌液分裝13個試管中”。 104-105個/mL是什么意思？（我是做藥物合成的，對抗菌測試是外行，不太懂，菌液濃度的表示方法是這樣的嗎？） 不同的菌株，都用這個濃度嗎？還是有區(qū)別？我打算做金葡和大腸桿菌。 這種方法有沒有什么標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程之類的呢？我在網(wǎng)上和文獻(xiàn)里沒檢索到，對這個領(lǐng)域不熟悉，可能檢索不到位吧。 希望專業(yè)人士賜教。 附一個我搜到的實(shí)驗(yàn)操作方法： 具體操作是：細(xì)菌檢測培養(yǎng)基通常采用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)，將約為104-105個/mL濃度的接種菌液分裝13個試管中，第一只試管中加入一定量的抗菌劑，并做2倍連續(xù)稀釋至第12只試管，第13只試管作為生長對照，放置在37。C培養(yǎng)16-24hr，觀察結(jié)果，無菌增殖的最高稀釋管的、抗菌濃度，為最低抑菌濃度(MIC)。 試驗(yàn)觀察一般要在12-18 時進(jìn)行，如時間過長，輕度抑制的細(xì)菌可能會開始繁殖，另一 方面一些抗菌劑因時間過長作用減弱，受抑制的細(xì)菌會再次繁殖。 [ Last edited by xiaoniu_e on 2011-11-1 at 22:49 ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhang8826857(金幣+4): good，看lz反饋，反饋的好可以向版主申請個epi哦^_^ 2011-11-02 15:22:28
xiaoniu_e(金幣+10): 很詳細(xì)！謝謝！ 再請教一下，含藥的母液，是用什么配制呢？也是液體培養(yǎng)基？ 2011-11-02 19:24:55
zhang8826857(金幣+4): good，看lz反饋，反饋的好可以向版主申請個epi哦^_^ 2011-11-02 15:22:28
xiaoniu_e(金幣+10): 很詳細(xì)！謝謝！ 再請教一下，含藥的母液，是用什么配制呢？也是液體培養(yǎng)基？ 2011-11-02 19:24:55
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第一，你需要確定你的細(xì)菌溶液中含有的細(xì)菌數(shù)量，可以通過測OD值，平板計(jì)數(shù)法等來測定。 第二，每個試管中加入1~2m（如果這里加入是1ml，后面也都加入1ml）l液體培養(yǎng)基，編好序號為1-13. 第三，在編號1的試管中加入藥液，這就根據(jù)你配制的母液和需要的濃度來加入，一般盡量是加入1~2ml的配置母液哈，然后1號管中吸取1~2ml的混合液體加入第2號試管中，依次逐個稀釋至第11號管，12號管為陽性對照（不加藥液，只加稀釋好的菌液），13號管為陰性對照（只有培養(yǎng)基，其余什么都不加入）（加入你要做的濃度是256 128 64 32 16 8 4 2 1 0.5 0.25，那么這步加入藥液后，液體中的藥物濃度應(yīng)該是512 256 128 64 32 16 8 4 2 1 0.5，是因?yàn)楹竺孢�有菌液將藥液進(jìn)行了2倍稀釋）。 第四，加入1ml稀釋好的菌液，放置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12-16h觀察結(jié)果。 |
4樓2011-11-02 12:22:00
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