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H-xiangzhu金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
微生物胞內(nèi)物質(zhì)與胞外代謝產(chǎn)物提取
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我要提取微生物胞內(nèi)和胞外代謝產(chǎn)物，要去除雜蛋白質(zhì)和菌體等，離心沉淀后， 1、上清液我加入草酸沉淀，后面加入丙酮溶解后離心去沉淀，請(qǐng)問(wèn)丙酮我怎么去除呢？ 2、對(duì)于胞內(nèi)蛋白，我加入無(wú)水乙醇超聲波破碎，后面離心去除沉淀，可是我的上清液中有無(wú)水乙醇，請(qǐng)問(wèn)用什么方法可以把無(wú)水乙醇去除呢？ 補(bǔ)充：1、我試驗(yàn)樣品很少，就只有小幾ml這樣 2、我們實(shí)驗(yàn)室只有真空泵，沒(méi)有旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀和吹氮儀 |
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HarveyWang
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
zhang8826857(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-11-11 11:29:53
zhang8826857(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-11-11 11:29:53
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樓主MM，還有其他的幾個(gè)小技巧，哥都一塊兒告訴你。 1.樣品幾毫升足夠啦。用那種 5mL的EP管，將丙酮或乙醇用抽風(fēng)機(jī)抽去還剩下大約 1ml的時(shí)候，里面主要的就是水分啦，再難風(fēng)干啦。。。這時(shí)就換成抽真空恒溫箱。 恒溫箱可以開(kāi)到40-50攝氏度，對(duì)于小分子的代謝物一般不會(huì)變質(zhì)的。 2.在抽真空的時(shí)候，一定要將EP管的蓋子完全打開(kāi)，然后慢慢抽，因?yàn)榭赡軙?huì)出現(xiàn)爆沸，將你的樣品都沖出來(lái)。所以這時(shí)候你要自己摸索一下抽的條件哈~~ |
5樓2011-11-07 14:19:23
2樓2011-11-07 13:02:19
H-xiangzhu
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3樓2011-11-07 13:56:38
HarveyWang
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhang8826857(金幣+3): good，看lz的反饋，lz反饋好可以向版主申請(qǐng)個(gè)EPI啊^_^ 2011-11-07 14:14:07
H-xiangzhu(金幣+1): 2011-11-07 15:23:40
zhang8826857(金幣+3): good，看lz的反饋，lz反饋好可以向版主申請(qǐng)個(gè)EPI啊^_^ 2011-11-07 14:14:07
H-xiangzhu(金幣+1): 2011-11-07 15:23:40
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1.我一般就是放在通風(fēng)櫥幾個(gè)小時(shí)，丙酮很快就揮發(fā)完了。剩余的主要是水分溶液。 乙醇的較難揮發(fā)，幾個(gè)小時(shí)后放在40攝氏度的抽真空的恒溫箱中，大約一個(gè)小時(shí)可以抽完剩余水分。 2.注意事項(xiàng)！ 這時(shí)候要注意，你到底是測(cè)什么？��！ 例如你要是測(cè)定發(fā)酵液的乙酸，肯定是要再抽之前加6M NaOH少許，將溶液變堿。因?yàn)樵谒嵝詶l件下，乙酸在最后快抽干的時(shí)候要揮發(fā)的! 3.無(wú)論是丙酮還是乙醇，除蛋白的效果走不足以立即上液相柱子。其中會(huì)有不少的蛋白殘留。即使是使用80%以上的乙醇。不信，你可以拿BSA蛋白做下測(cè)試，看看跟三氯乙酸相比，能不能有多少蛋白沉淀。 但是，這一步中有一個(gè)很好的去處蛋白的方法。就是最后的干燥抽真空步驟。當(dāng)接近干燥的時(shí)候，所有的細(xì)胞蛋白都回變性沉淀的！ 就是說(shuō)，對(duì)于干燥抽干的樣品，你只要用水溶液溶解，然后10000 rpm離心5-10分鐘，上清中就幾乎沒(méi)有蛋白了。 細(xì)胞蛋白都回變成一團(tuán)沉在管子的底部。上清你可以直接上樣過(guò)柱子。 |
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H-xiangzhu4樓2011-11-07 14:10:46
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