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tco_001新蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于Q-PCR的一些疑問(wèn)
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最近在做Q-pcr，要擴(kuò)增一個(gè)表達(dá)量很底的mRNA 設(shè)計(jì)了引物上機(jī)去做，溶解曲線不單一有兩個(gè)峰，一個(gè)大一點(diǎn)一個(gè)小一點(diǎn)，大一點(diǎn)的應(yīng)該是產(chǎn)物，但兩峰高度差距不算太大，距離倒是蠻遠(yuǎn)的 擴(kuò)增曲線測(cè)定的Ct值在32左右，由于樣品的原因，提取的RNA可能不是很純，RNA濃度也不好提高了 改變過(guò)退火溫度，變化不大 換過(guò)很多引物，由于這個(gè)mRNA豐度太低，很多的引物都擴(kuò)不出來(lái) 儀器自動(dòng)分析的CT值在復(fù)孔之間差距0.5以內(nèi) 想問(wèn)一下，我這個(gè)數(shù)據(jù)可以用么，如果不行要怎樣提高擴(kuò)增的特異性或者怎樣改變一下？ |
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