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3.7Kb片段基因與7Kb載體的質(zhì)粒構(gòu)建
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如題，基因片段3.7Kb載體7Kb，Phage載體。 連接了幾次都失敗了。要么轉(zhuǎn)化后沒有長出克隆，要么長出來也是假陽性，小提質(zhì)粒后酶切片段大小不對額  大片段不好連呢，求高手指教有妙招改進(jìn)么？？  (轉(zhuǎn)化采用的超級感受態(tài)細(xì)胞，42度30s) |
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2樓2011-11-17 18:06:25
3樓2011-11-17 18:10:05
4樓2011-11-17 18:34:36
5樓2011-11-17 19:42:01
6樓2011-11-17 20:09:46
7樓2011-11-17 20:10:57
srlee
鐵桿木蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
林夕夢(金幣+5): 聽你這么說，頓時(shí)又有了信心。不過細(xì)節(jié)的應(yīng)該沒啥問題的，下次在調(diào)節(jié)一下連接體系吧 2011-11-17 20:56:54
西瓜(金幣+2): Good！ 2011-11-17 21:37:58
wanhscn(金幣+2, MolEPI+1): 是的!鼓勵(lì)應(yīng)助回帖!PS:我也連過10K的,沒有那么難!希望老兄繼續(xù)踴躍回帖! 破格授予專家指數(shù)一枚 ! 2011-11-19 18:53:58
林夕夢(金幣+5): 聽你這么說，頓時(shí)又有了信心。不過細(xì)節(jié)的應(yīng)該沒啥問題的，下次在調(diào)節(jié)一下連接體系吧 2011-11-17 20:56:54
西瓜(金幣+2): Good！ 2011-11-17 21:37:58
wanhscn(金幣+2, MolEPI+1): 是的!鼓勵(lì)應(yīng)助回帖!PS:我也連過10K的,沒有那么難!希望老兄繼續(xù)踴躍回帖! 破格授予專家指數(shù)一枚 ! 2011-11-19 18:53:58
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這個(gè)片段3.7Kb，載體7Kb連接應(yīng)該是很好連接地，我們超過10kb的連接經(jīng)常做也沒有多大的問題，只是連接效率比小片段低一些。 至于連接要注意實(shí)驗(yàn)中的一些小細(xì)節(jié)問題：酶切割膠回收純化是否干凈？連接體系比例合不合適？感受態(tài)細(xì)胞好不好？等等啦！ Takara的酶和NEB的酶都很好用的！祝實(shí)驗(yàn)順利！ |
8樓2011-11-17 20:31:40
求指導(dǎo) 
林夕夢9樓2011-11-17 21:01:07
加油 10樓2011-11-17 21:07:48
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