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clx@6016金蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞的制備中遇到的問(wèn)題 已有6人參與
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| 各位蟲(chóng)友好，想請(qǐng)教下大腸桿菌電轉(zhuǎn)化方面的一些問(wèn)題，希望各位蟲(chóng)友多多指教 .最近一直在做電轉(zhuǎn)化，可每次制備的電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞都不行，最開(kāi)始做的還可以達(dá)到10的六次方，可最近兩次做的，貌似做好的電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞里面的菌體全都死了？是為什么呢？有人有遇到這種情況的嗎？還望各位網(wǎng)友多多指教，感激不盡哈！急急急�。。� |
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9樓2018-07-28 09:34:26
shuangzi8761
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2樓2011-11-26 17:32:10
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3樓2011-11-27 09:59:56
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先把新鮮劃好的菌接到含有Amp的3mlSOB試管中，30度過(guò)夜培養(yǎng)，第二天以1:50的接種量轉(zhuǎn)接到50ml含有Amp的SOB中(轉(zhuǎn)接之前加入MgCl2)，30度搖菌2小時(shí)，OD600為0.1左右，然后加入L-阿拉伯糖誘導(dǎo)35分鐘，OD600為0.3-0.4左右。5000轉(zhuǎn)，4度離心10分鐘，收菌。然后用10%甘油重懸3次，5000轉(zhuǎn)，4度離心10分鐘。最后將菌體濃縮500到800倍后保存在10%甘油中。然后立刻電轉(zhuǎn)！如果有什么問(wèn)題，還請(qǐng)各位前輩多多指教哈！ |
4樓2011-11-28 21:22:16
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