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tongxinkxy銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
Sac II,EcoR I,Ssp I三酶切問(wèn)題
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一環(huán)形質(zhì)粒，紅色為我的目的片段，要獲得這個(gè)目的片段，設(shè)置了3個(gè)酶切位點(diǎn)（如果雙酶切的話(huà)，目的基因和T載體酶切后電泳無(wú)法分開(kāi)） 但是目前3個(gè)酶各自酶切均可以，但是3酶切或者任何兩個(gè)酶雙酶切均失敗 原本計(jì)劃為： 首先用Sac II, Ssp I雙酶切得到2100和3400bp片段，預(yù)想獲得3400bp片段后，膠回收再用 EcoR I 單酶切獲得600和2800bp的目的片段，但是首先雙酶切就沒(méi)有成功 Sac II, Ssp I雙酶切體系為 ： 酶各1 T緩沖液 2 BSA 2 質(zhì)粒 0.6ug 加水到20 （TAKARA的） 如果說(shuō)單酶切一次一次切的話(huà)，膠回收的濃度不夠下次及下下次酶切濃度，是否有好的濃縮DNA的方法？ |
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