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xiaoyang123金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
PCR產(chǎn)物用CyberGreen染色時(shí)遇到的問(wèn)題
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今天第一次用SYBR Green代替EB進(jìn)行染色,照膠后顯示的結(jié)果有點(diǎn)詭異:marker和引物二聚體異常明顯,和marker一樣亮,其它的條帶什么都沒(méi)有,干干凈凈的。并且1000bp的引物沒(méi)有跑開(kāi),全都聚集在底部,且拖帶嚴(yán)重。重復(fù)了兩次實(shí)驗(yàn)均是以上結(jié)果。 我的目標(biāo)片段在1100bp左右,會(huì)不會(huì)是跑出來(lái)了但是沒(méi)染上,看marker的樣子,貌似越接近底部(即分子量越低),條帶越亮,而膠的中上部分幾乎沒(méi)有任何條帶了。 不知是否是我的使用方法出現(xiàn)了問(wèn)題——我配了40mL的膠(1%瓊脂糖),在倒膠前,幾乎不燙手的時(shí)候,加入4μL的SYBR Green(如說(shuō)明書(shū)所示1/10000),混勻后倒膠。 跑完電泳立刻照膠。 會(huì)不會(huì)是因?yàn)闆](méi)有靜止足夠的時(shí)間呢,或者SYBR Green比較不容易和長(zhǎng)片段結(jié)合? 之前用EB泡膠的時(shí)候引物二聚體并沒(méi)有這么嚴(yán)重,而且有許多條帶(包括許多非特異性擴(kuò)增),可是用SYBR Green卻是以上結(jié)果。感覺(jué)有點(diǎn)詭異,不知何解,還望各位多多指教~~~ |
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