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xiaoyang123金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
PCR產(chǎn)物用CyberGreen染色時(shí)遇到的問(wèn)題
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今天第一次用SYBR Green代替EB進(jìn)行染色，照膠后顯示的結(jié)果有點(diǎn)詭異：marker和引物二聚體異常明顯，和marker一樣亮，其它的條帶什么都沒(méi)有，干干凈凈的。并且1000bp的引物沒(méi)有跑開(kāi)，全都聚集在底部，且拖帶嚴(yán)重。重復(fù)了兩次實(shí)驗(yàn)均是以上結(jié)果。 我的目標(biāo)片段在1100bp左右，會(huì)不會(huì)是跑出來(lái)了但是沒(méi)染上，看marker的樣子，貌似越接近底部（即分子量越低），條帶越亮，而膠的中上部分幾乎沒(méi)有任何條帶了。 不知是否是我的使用方法出現(xiàn)了問(wèn)題——我配了40mL的膠（1%瓊脂糖），在倒膠前，幾乎不燙手的時(shí)候，加入4μL的SYBR Green（如說(shuō)明書(shū)所示1/10000），混勻后倒膠。 跑完電泳立刻照膠。 會(huì)不會(huì)是因?yàn)闆](méi)有靜止足夠的時(shí)間呢，或者SYBR Green比較不容易和長(zhǎng)片段結(jié)合？ 之前用EB泡膠的時(shí)候引物二聚體并沒(méi)有這么嚴(yán)重，而且有許多條帶（包括許多非特異性擴(kuò)增），可是用SYBR Green卻是以上結(jié)果。感覺(jué)有點(diǎn)詭異，不知何解，還望各位多多指教~~~ |
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2樓2011-12-19 12:41:15
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