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關(guān)于蒽酮法測總糖
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用蒽酮法測果實中總糖,樣很多,麻煩蟲友們給點建議吧。還沒有開始做,有什么具體的方法或者注意事項,或者簡單有效的方法,謝謝大家啦 [ 來自科研家族 OMICS家族 ] |
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銅蟲 (小有名氣)
木蟲 (著名寫手)
可溶性糖測定有個過濾過程很麻煩額!下面是實驗步驟(李玲,2009,植物生理學模塊實驗指導(dǎo)(很好的一本實驗指導(dǎo)書)) (一)可溶性糖的提取 稱取新鮮果肉0.5-1.0g(或植物葉片或種子于105~110℃烘箱殺青15 min,然后將溫度調(diào)至70~80℃烘干至恒重,磨碎烘干的葉片或種子),剪碎研磨至勻漿,倒入三角瓶(50ml)中,加入10mL80%乙醇,置于80℃水浴中不斷攪拌40 min,冷卻后4000g離心10min,殘渣加5mL 80%乙醇重復(fù)提取2次,合并上清液。在收集液中加10 mg活性炭,80℃脫色30 min,過濾,80%乙醇定容至25mL,取濾液供測定。 (二)顯色及比色 吸取上述乙醇提取液0.2mL加入0.8ml蒸餾水混合,再加入5mL蒽酮試劑,沸水浴中顯色10 min,取出冷卻。在波長625 nm處測吸光值。從標準曲線上查取可溶性糖的含量。 (三)繪制標準曲線 取標準葡萄糖溶液將其稀釋成0~100 μg•mL-1的不同濃度的溶液(0、10、20、40、60、80、100 μg•mL-1)。分別取1 mL,按上述方法進行顯色、比色,測定625 nm處的吸光值, 繪制標準曲線。 可溶性糖含量(mg/g)=C*V*n/a*W*1000 式中:C為查到的待測果實中葡萄糖含量(ug/ml);a為樣品提取液體積(ml);V為提取液定容體積(ml);n為稀釋倍數(shù);W為果實重量(g) 注意事項:1.蒽酮試劑與糖反應(yīng)的呈色程度隨時間發(fā)生變化,故樣品要盡快比色; 2.顯色反應(yīng)非常靈敏,所用器皿需潔凈! 樓主說樣品多,實驗量大,就預(yù)先找?guī)讉趁手的幫手,祝樓主試驗順利! |

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