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foreverjohn金蟲 (小有名氣)
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[求助]
RNA 電泳25min 與10 min的區(qū)別
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最近跑了一次RNA非變性電泳，RNA+loading buffer 65 oC 10min，然后4 oC，電泳使用的是實驗室常用電泳槽，洗滌劑洗滌，雙氧水浸泡30min，DEPC處理水配置的高壓滅菌電泳液，電泳設(shè)置為150V，約10V/cm，發(fā)現(xiàn)電泳10min時，26S：18S<1,而電泳時間25min時，26S：18S>2（這是降解產(chǎn)生的么），并且26S上面有大量彌散的帶（這是DNA污染嗎？）。 |
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shaquila
金蟲 (正式寫手)
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2樓2011-12-15 21:37:38
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西瓜(金幣-3, 違規(guī)存檔): 廣告 2012-01-13 11:12:19
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3樓2012-01-13 10:22:36
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木(金幣+2): 鼓勵積極分享經(jīng)驗 2012-01-13 17:24:27
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小丹木木(金幣+2): 鼓勵積極分享經(jīng)驗 2012-01-13 17:24:27
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我覺得你的RNA提得挺好的。 10V/cm可能電壓有點大，調(diào)小一點吧，marker跑起來都有點變形了～ 另外，你跑非變性膠上樣前不用60度處理的吧？我一般是不處理的，直接上。 你10min時那個26S還沒完全跑開，故染色看起來沒有18s亮，但不能就這樣判斷26S:18S<1；20min后，條帶完全跑開了，所以26S亮度正常回來了。 DNA污染不是迷散的帶。你marker也有迷散....估計是有些雜質(zhì)或曝光太強了，把一些微弱的東西也拍出來了。 |
4樓2012-01-13 15:51:55
神經(jīng)再生
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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