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xiaoqiu2010金蟲 (小有名氣)
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[求助]
藥代動力學(xué)血樣處理問題
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我剛剛接觸藥代動力學(xué)，對血樣的處理有很多問題，忘高手指點： 1、我的藥品在水中不溶，加吐溫80和甘油后可澄清，是否可以靜脈注射？還有對于吐溫與甘油的量有沒有要求？ 2、血樣處理我選擇的乙酸乙酯+甲醇萃取，我的操作步驟是請萃取，離心，取上清，吹干，復(fù)溶，HPLC分析 問題是：A：一般萃取幾次，萃取一次可以嗎？ B：萃取之后取上清是定量取，還是全部取出？如果全部取出，每個樣品不能保證萃取率相同怎么辦？ C:吹干復(fù)溶的體積一般多大，我計劃取100uL血漿，300uL萃取劑萃取。我的問題是轉(zhuǎn)移到容量瓶定容是否可行？因為有人建議我轉(zhuǎn)移到容量瓶，但是我覺得，轉(zhuǎn)移過程可能會有損失，并且容量瓶定容是否會稀釋倍數(shù)太高，檢測不到？ 3、看文獻有用沉淀蛋白的方法，離心直接進樣，這樣對柱子的損傷有多大？柱子一般使用壽命會多長？ 希望有人能給與知道，謝謝！ |
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 藥代動力學(xué)…… |
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xiaoqiu2010(金幣+5): ★★★很有幫助 十分感謝 2012-01-09 20:53:39
xiaoqiu2010(金幣+5): ★★★很有幫助 十分感謝 2012-01-09 20:53:39
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1、我的藥品在水中不溶，加吐溫80和甘油后可澄清，是否可以靜脈注射？還有對于吐溫與甘油的量有沒有要求？ 建議多嘗試幾個常用溶劑，乙醇，異丙醇，乙醇注射液中濃度不要超過5%，不過這是基于動物福利來講得。適當可以放寬到10%，再高就影響動物代謝了。 也可以嘗試DMSO，注射液中濃度不超過5%。目前歐盟已經(jīng)禁止在動物實驗中使用了，不過國內(nèi)還沒有規(guī)定。 2、血樣處理我選擇的乙酸乙酯+甲醇萃取，我的操作步驟是請萃取，離心，取上清，吹干，復(fù)溶，HPLC分析 問題是：A：一般萃取幾次，萃取一次可以嗎？ 萃取的次數(shù)主要看你的方法回收率，一般在80%以上就沒有關(guān)系。反正你標準曲線同樣方法操作，不影響結(jié)果。但是萃取前要加入內(nèi)標。 B：萃取之后取上清是定量取，還是全部取出？如果全部取出，每個樣品不能保證萃取率相同怎么辦？ 使用內(nèi)標法就隨便取，不會有問題。不過如果不定量取，最后內(nèi)標會比較難看，建議還是定量取。但是這樣在回收率上會有損失。 在樣品較稀有的情況下，才使用全部取出的方法。 C:吹干復(fù)溶的體積一般多大，我計劃取100uL血漿，300uL萃取劑萃取。我的問題是轉(zhuǎn)移到容量瓶定容是否可行？因為有人建議我轉(zhuǎn)移到容量瓶，但是我覺得，轉(zhuǎn)移過程可能會有損失，并且容量瓶定容是否會稀釋倍數(shù)太高，檢測不到？ 300ul這么小的容量瓶？ PK實驗一般都是在1.5ml的離心管里配樣的。使用普通的移液器來做定量。不明白容量瓶的用意。 3、看文獻有用沉淀蛋白的方法，離心直接進樣，這樣對柱子的損傷有多大？柱子一般使用壽命會多長？ 直接沉淀完全沒有問題。CRO公司都是首推直接沉淀，多么經(jīng)濟實惠的方法。UPLC的柱子，那要做好保護，如果是普通的柱子，隨便折騰吧，耐用著呢，就是大量進樣后記得沖洗保養(yǎng)就好了。 |
6樓2011-12-26 15:27:55
xiaofeiwa
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7樓2011-12-26 15:31:02
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8樓2012-05-10 20:08:20
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9樓2012-05-15 20:56:38
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