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ycttfeng木蟲 (小有名氣)
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[求助]
很奇怪的連接產(chǎn)物
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最近準(zhǔn)備表達(dá)蛋白，首先擴(kuò)增了目的片段，連到Blunt載體（3900多bp）上，測序正確。將目的片段（2200多bp）從Blunt上雙酶切后回收，與pET16b（5700多bp）相連，挑了四個單克隆，提質(zhì)粒雙酶切后，總是出現(xiàn)這樣的結(jié)果：目的片段大小是對的，但載體的大小不對。這到底是為什么為什么呢？已經(jīng)出現(xiàn)了很多次這樣的情況了，一直找不到原因。請各位高手指點 電泳圖傳不上來 郁悶啊。。。。。 |
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rintor
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2樓2011-12-21 11:48:35
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4樓2011-12-21 15:22:03
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
ycttfeng(金幣+2): ★★★很有幫助 高人�。∏型旰�，載體的大小差不多就是3900這樣子，接近4000，所以我嚴(yán)重懷疑是Blunt載體，但是想想，我切完Blunt-目的片段后，回收了目的片段那部分啊，所以怎么可能呢。。。。。。百思不得其解。。。。。 2011-12-21 20:25:01
西瓜(金幣+3): Good！ 2011-12-21 21:59:23
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ycttfeng(金幣+2): ★★★很有幫助 高人�。∏型旰�，載體的大小差不多就是3900這樣子，接近4000，所以我嚴(yán)重懷疑是Blunt載體，但是想想，我切完Blunt-目的片段后，回收了目的片段那部分啊，所以怎么可能呢。。。。。。百思不得其解。。。。。 2011-12-21 20:25:01
西瓜(金幣+3): Good！ 2011-12-21 21:59:23
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1、建議：單酶切和雙酶切同時進(jìn)行，切1-2h就足夠了，不需要切4.5h，看看單酶切的時候總的大小是不是對的？ 2、仔細(xì)檢查pET16b載體上你選的那兩個酶切位點是單一的 3、目前實驗?zāi)惆l(fā)現(xiàn)酶切后載體變小了，那它現(xiàn)在是多少大小，和5700bp相差多少，和3900bp相差多少呢？？這個仔細(xì)看一下 |
5樓2011-12-21 19:01:22
panda73
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6樓2011-12-21 21:04:18
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