 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2658 | 回復(fù): 11 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
求索尋覓金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
大家?guī)兔Ψ治鱿码p向電泳結(jié)果不好的原因（有圖）
|
||
|
裂解液配方是：7M尿素，2M硫尿，4%CHAPS，0.3% Bio-lyte，65 mM DTT，加入了羅氏蛋白酶抑制劑。大鼠肝臟在液氮中研磨，大約0.1 g肝臟加入了1ML裂解液，然后冰浴超聲了1分鐘（就是放進(jìn)去超聲零點(diǎn)幾秒然后拿出1秒，再放進(jìn)去，搞了1分鐘）。冰上裂解1h后，35000 g離心 90 min（這個(gè)轉(zhuǎn)速已經(jīng)是我們實(shí)驗(yàn)的極限了）。吸取上清做后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 測定了蛋白濃度大概為20mg/ml，水化時(shí)吸取了100ul 加入400ul 水化緩沖液（水化緩沖液配方和裂解液一致），上樣450ul進(jìn)行水化，我做的是24cm的膠條，ph 3-10。我做了三根膠條，2根在水化緩沖液家了DTT，第三根加了 TBP（據(jù)說TBP可以很好的解決堿性端橫紋的問題）。水化了大概14h，然后進(jìn)行等點(diǎn)聚焦。程序如下 100v 緩慢 1h 200v 緩慢 1h 500v 緩慢 1h 1000v 緩慢 1h 10000v 線性 4h 10000v 快速 100000v.H 500 v 快速 24h 聚焦后用的gel膠為10%的，先用50v，再用200v跑完。 結(jié)果如下圖，分別為1，2，3，左邊是正極端。請大家?guī)兔Ψ治鱿略�，不甚感激�?br /> ps：我已經(jīng)做了幾個(gè)月了，結(jié)果總這樣差不多爛，別人論文里面也是這樣，但是圖譜上蛋白點(diǎn)多很多，也分散的均勻，實(shí)在想不明白。 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 電泳、bio-rad 電轉(zhuǎn)化儀及操作 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有291人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 武漢哪里有做雙向電泳和質(zhì)譜分析？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 請教大家關(guān)于雙向電泳的問題~
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 請大家?guī)兔Ψ治鱿挛业腟DS-PAGE蛋白檢測膠啊
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 雙向電泳，蛋白定量測定用方法的討論
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 雙向電泳圖求助
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 雙向電泳，剛提出來的總蛋白，在裂解液里可以4度放多久啊？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 關(guān)于SDS-PAGE與雙向電泳的請教
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 雙向電泳 蛋白純化
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 大家?guī)兔Ψ治鲆幌翽CR電泳圖
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】大家?guī)兔聪挛业腜CR電泳圖，急！做了7.8次還是這樣。
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】求熒光差異雙向電泳 的分析軟件 說明書
已經(jīng)有3人回復(fù)
3樓2011-12-22 10:03:59
zjkown
木蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2391.9
- 帖子: 36
- 在線: 260小時(shí)
- 蟲號(hào): 306941
- 注冊: 2006-12-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
2樓2011-12-22 06:44:19
Rubisco580
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 66 (初中生)
- 金幣: 997.7
- 紅花: 7
- 帖子: 264
- 在線: 48.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 553802
- 注冊: 2008-05-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
4樓2011-12-22 16:35:41
求索尋覓
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 884.7
- 帖子: 125
- 在線: 14小時(shí)
- 蟲號(hào): 993161
- 注冊: 2010-04-10
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
5樓2011-12-30 22:27:46
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | dfffsar 2026-03-29 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿北京工業(yè)大學(xué)，324分求調(diào)劑 +6 | 零八# 2026-03-28 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 375求調(diào)劑 +4 | 雨夏整夜 2026-03-29 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 340求調(diào)劑 +6 | Amber00 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +7 | 璞玉~~ 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 311（085601）求調(diào)劑 +4 | liziyeyeye 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿華理，數(shù)一英一285求A區(qū)調(diào)劑 +8 | AZMK 2026-03-25 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 本科新能源科學(xué)與工程，一志愿華理能動(dòng)285求調(diào)劑 +3 | AZMK 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +7 | 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等調(diào)劑 +7 | 哇呼哼呼哼 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +7 | A child 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑一志愿哈工大324 +7 | 閆旭東 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑11408 +3 | 劉小鹿lu 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +7 | 腳滑的守法公民 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 266分求材料化工冶金礦業(yè)等專業(yè)的調(diào)劑 +4 | 哇呼哼呼哼 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿 南京航空航天大學(xué)大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +4 | @taotao 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑求收留 +7 | 果然有我 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +7 | prayer13 2026-03-23 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +7 | 加一一九 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料專碩331求調(diào)劑 +4 | 鮮當(dāng)牛 2026-03-24 | 4/200 |
|