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熒光定量擴(kuò)增曲線與融解曲線分析
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剛開(kāi)始做熒光定量，有關(guān)擴(kuò)增曲線和溶解曲線的問(wèn)題想要請(qǐng)教高手?擴(kuò)增曲線如圖1：為什么在剛出現(xiàn)平臺(tái)期后2、3個(gè)循環(huán)又有上升，這種情況應(yīng)該怎么改善PCR體系或條件？ 溶解曲線如圖2：融解溫度從55度到95度，55到退火溫度87度間不平整的微小峰值是什么意思，這樣的曲線能用嗎，還是引物仍有問(wèn)題？ 圖1 擴(kuò)增曲線 圖2 融解曲線 融解曲線 |
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LZ放心吧，你的定量引物沒(méi)有任何問(wèn)題，做出來(lái)的圖也很漂亮，放到論文上是不會(huì)有任何問(wèn)題的。 從融解曲線來(lái)看的話，你得擴(kuò)增產(chǎn)物是單一的（在主峰之前的亞峰不影響結(jié)果），如果LZ還不放心的話建議LZ可以講擴(kuò)增產(chǎn)物跑個(gè)瓊脂糖電泳 |
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妙贊爆米花3樓2011-12-26 13:43:20
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| 從個(gè)人實(shí)際經(jīng)驗(yàn)來(lái)講，你的結(jié)果應(yīng)該是沒(méi)有問(wèn)題的，可以放心使用。引物的擴(kuò)增效率、特異性和模板的量都是合適的，Ct值也在合適的范圍。重復(fù)性也很好。只是你為什么只做兩個(gè)重復(fù)呢？原則上應(yīng)該至少是三個(gè)重復(fù)呢？ |
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