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[交流]
心肌細胞培養(yǎng)交流
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以下是我的實驗步驟 1. 2-4天大鼠乳鼠酒精浸泡15秒，取心，置于有4度pbs的培養(yǎng)皿中，用pbs清洗2遍 2. 剔除心臟周圍的血凝及纖維組織，抽取5ml胰酶，少量放入50ml燒杯中，大部分（留點沖洗）倒入50ml離心管，將心臟放入小燒杯剪碎，倒入50ml離心管，用剩余的胰酶沖洗一遍。 3. 消化：將含有心肌的50ml的離心管放入34℃的水浴鍋中10min，輕輕晃動數次。第一次消化液棄去。以后消化為8分鐘（中間搖晃幾次）。 4. 離心：補加3ml 胰酶入2步驟中的離心管，繼續(xù)消化。第二次以后的消化液輕輕吹打，自然沉淀，各取2ml上清放入2 只（1,2號）離心管，再各加入2mlDMEM離心8分鐘（1000轉）。離心好的1,2號離心管，棄上清，加1mlDMEM重懸，收集于一只15ml離心管中。 5. 重復消化和離心。將所有離心過的細胞重懸后收集于離心管，再次離心8分鐘，棄上清，加入含有20%胎牛血清、雙抗、brdu的DMEM 4ml，重懸，過100、200目不銹鋼篩網。 6. 過篩后的細胞液放入細胞瓶，90min差數貼壁。調整細胞濃度500000個每毫升。種于24孔板中。我6只大鼠乳鼠心臟種了6孔。24小時換液，此后隔日換液。 結果： 離心后細胞數目較多，細胞小而圓。 24小時換液后，細胞數目明顯減少，貼壁細胞稀疏，小而圓，部分會抖動。 48小時觀察，細胞小，量少，不動 交流： 第一次換液，48小時會不會好一點？ 我的細胞24小時的時候都是圓的是怎么回事？ 有沒有哪位高人有成熟的心肌細胞培養(yǎng)方法？？ 膠原酶好貴啊。。真心用不起誒。。�？�。。。 |
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