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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 酶切鑒定圖
| 查看: 1965 | 回復(fù): 10 | |||
linatracy金蟲 (小有名氣)
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[交流]
酶切鑒定圖 已有8人參與
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大家?guī)兔纯�，我這酶切鑒定的圖，帶特別淡，怎么樣才可以使帶變的亮呢？ Mark 為D15000的，后面兩個都是酶切鑒定的 再注明一下，我跑28b的質(zhì)粒的時候帶就特別淡，之后做的連接，你們覺得是不是和我的質(zhì)粒量少有關(guān)系呢？還有這樣子的連接產(chǎn)物對表達量有沒有關(guān)系？謝謝各位同仁了。 [ Last edited by linatracy on 2012-1-5 at 12:17 ] |
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linatracy
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9樓2012-01-06 00:13:31
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
wanhscn(金幣+3, 專家考核): good！whs 2012-01-04 20:33:39
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wanhscn(金幣+3, 專家考核): good！whs 2012-01-04 20:33:39
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上樣量可以加大點。如果是全部都拿來上樣的，那酶切的DNA就應(yīng)該用多一點了。 酶切前可以粗略計算下你的DNA濃度有多少，然后根據(jù)片段長度估計下酶切之后的條帶分別有多少ng，之后調(diào)整酶切的DNA量。EB染色的話10ng就可以看到條帶，但建議你保證每條帶都在50ng以上，這樣的條帶就不會淡了。 舉個例子：100ng的4kb的質(zhì)粒，完全酶切之后，一條帶是3kb，另一條是1kb，那它們的量就分別是75gn和25ng。這樣子的話1 kb的帶會比較弱。所以你應(yīng)該切至少200ng的質(zhì)粒。 不過也不是多多益善，太多的質(zhì)粒，會酶切不完全甚至切不動。而且質(zhì)粒本身因為不同構(gòu)型就有2、3條帶，會干擾結(jié)果。 |
2樓2012-01-04 12:32:22
lw19850128
銀蟲 (小有名氣)
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3樓2012-01-04 14:24:03
yidaqunyan
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
wanhscn(金幣+1): 也是個方法！ 2012-01-05 11:28:51
wanhscn(金幣+2): 追加獎勵！ 2012-01-05 11:29:22
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wanhscn(金幣+1): 也是個方法！ 2012-01-05 11:28:51
wanhscn(金幣+2): 追加獎勵！ 2012-01-05 11:29:22
| 可以PS，帶就亮了。。 |
4樓2012-01-04 18:22:13
5樓2012-01-04 20:00:34
fanfenggui
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6樓2012-01-05 00:11:28
liuyu_sdili
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