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ziyan1906

銀蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] RT-PCR跑出來(lái)的條帶沒(méi)有量效關(guān)系怎么辦？什么原因

RT-PCR重復(fù)不同次數(shù)，跑出來(lái)的條帶也會(huì)不一樣，而且不同濃度梯度出現(xiàn)的條帶亮度和ELISA結(jié)果并不一致，這是怎么回事呢？？

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1樓 2012-01-09 11:16:08

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liuwei10987

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西瓜(金幣+5): 鼓勵(lì)交流~春節(jié)快樂(lè)哈~ 2012-01-26 19:05:02

rt-pcr條件要求非常嚴(yán)格，需要在完全無(wú)rna酶的情況下進(jìn)行，槍頭、離心管等器具都要用DEPC水泡過(guò)，這樣才能有良好的重現(xiàn)性，不知道是不是這個(gè)原因。

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2樓2012-01-26 16:35:15

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dxzhaomiao

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樓主是做的半定量RT-PCR，還是實(shí)時(shí)熒光定量PCR？半定量我做過(guò)很多次，要想多次重復(fù)完全沒(méi)有變化是比較難的，你需要在較低的循環(huán)數(shù)（15~18）下先調(diào)整模版濃度，還要注意PCR反應(yīng)液誤差，不同的移液器誤差，不同的PCR儀誤差。如果樓主做的是半定量，注意這些問(wèn)題應(yīng)該就可以了。還不行的話，建議做熒光定量

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3樓2012-01-29 14:08:24

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引用回帖:

樓: Originally posted by dxzhaomiao at 2012-01-29 14:08:24:
樓主是做的半定量RT-PCR，還是實(shí)時(shí)熒光定量PCR？半定量我做過(guò)很多次，要想多次重復(fù)完全沒(méi)有變化是比較難的，你需要在較低的循環(huán)數(shù)（15~18）下先調(diào)整模版濃度，還要注意PCR反應(yīng)液誤差，不同的移液器誤差，不同的PC ...

PCR反應(yīng)液誤差是什么意思？現(xiàn)在已經(jīng)降低循環(huán)數(shù)了，效果好點(diǎn)，還是很謝謝了，呵呵！

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4樓2012-02-12 17:53:07

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