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renchailp銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
HPLC基線問題請(qǐng)教
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小弟關(guān)于HPLC基線有些疑問，抓了3張屏，請(qǐng)大家看看，給點(diǎn)意見，非常感謝！ 儀器是varian prep star, 紫外檢測(cè)器，可以同時(shí)檢測(cè)190~900nm的吸收。 第一張圖片有很多鋸齒形狀的基線，這代表是氣泡嗎？還是什么別的原因？ 第二和第三張圖片是同一次run，沒有打樣品，分別是192nm和255nm的吸收。淋洗條件是60分鐘從50%乙腈/水升到100%乙腈，192nm的吸收特別的雜，但是在255nm基線還算平整。我查了下乙腈的UV cutoff 是190nm，是不是表示這些雜峰就不是乙腈了？這是不是代表這個(gè)柱子臟得不行了？我淋洗了好幾個(gè)小時(shí)都是這個(gè)樣子  非常感謝，金幣一定送上！  氣泡嗎？ 192nm吸收 255nm吸收 |
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wqs43
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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2樓2012-01-14 13:41:22
3樓2012-01-14 13:55:14
癡夷子皮
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
renchailp(金幣+2): thank you so much!!! 2012-01-15 02:44:05
renchailp(金幣+2): thank you so much!!! 2012-01-15 02:44:05
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第一張圖片 1、檢測(cè)器問題，譬如檢測(cè)池有氣泡、檢測(cè)池污染（卸下取出凸鏡等配件異丙醇超聲清洗）；譬如氘燈老化、光柵老化、電路板故障燈（自檢、工程師——更換配件） 2、電源電壓?jiǎn)栴}（使用穩(wěn)壓電源） 3、靜電干擾（檢查地線是否脫落） 4、流動(dòng)相問題，有氣泡或者所用試劑雜質(zhì)限度高。（超聲、更換、通過不跑流動(dòng)相時(shí)考察基線狀態(tài)判斷） 5、色譜柱污染、管路污染（這種情況基線波動(dòng)不會(huì)太過規(guī)律，估計(jì)不是） 第二和第三張圖片 背景吸收問題，200nm左右，背景吸收都很高，使用默克試劑，因雜質(zhì)限度問題，背景吸收相對(duì)較小。 |
4樓2012-01-14 22:47:56
5樓2012-01-15 08:16:21
zz831024 
金蟲 (小有名氣)
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renchailp6樓2012-01-15 16:55:12
renchailp
銅蟲 (小有名氣)
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7樓2012-01-16 02:00:05
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西湖醉魚(金幣+1, ACI+1): 歡迎來到分析版指導(dǎo) 2012-01-16 17:56:01
西湖醉魚(ACI-1): 2012-01-16 17:56:19
西湖醉魚(金幣+1, ACI+1): 歡迎來到分析版指導(dǎo) 2012-01-16 17:56:01
西湖醉魚(ACI-1): 2012-01-16 17:56:19
| 上面幾位樓主基本已經(jīng)說出了原因，但具體是什么原因還得一步一步排除：首先，排除是否接口漏液；然后，不裝柱子看看基線問題；如有問題更改檢測(cè)波長(zhǎng)，避免檢測(cè)波長(zhǎng)的影響；還有就是排除流動(dòng)相的影響，改變流動(dòng)相比例和流速；等以上問題排除完畢基線穩(wěn)定之后再裝柱子，對(duì)比基線。暫時(shí)能總結(jié)這么多，還請(qǐng)補(bǔ)充。 |
8樓2012-01-16 11:24:53
renchailp
銅蟲 (小有名氣)
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解決的辦法是在檢測(cè)器流出管子上接一個(gè)塑料的東西提高壓力到40（我不確定是psi還是bar），這樣從檢測(cè)器流出的都沒有氣泡了基線非常平，happy ending 
9樓2012-01-20 10:07:27
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