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1289622木蟲 (正式寫手)
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[求助]
色譜柱柱壓高的問題
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色譜柱C18（5μm，4.6×150mm），有預(yù)柱，純乙腈柱壓50，純甲醇柱壓170，甲醇：水=70:30柱壓350，儀器通道很正常，壓力顯示也很正常，沒接柱子壓力顯示都很小。 1、我的柱子是不是堵了？如果堵了，怎么用乙腈柱壓還比較低呢？什么原因？怎么辦？ 2、網(wǎng)上有的說可以將柱子以低流速反沖，這樣可以嗎？如果可以，流速多大，反沖多久（時(shí)間久了對柱子是不是不好啊），用什么樣的流動(dòng)相？ 3、基線怎么總是向下漂？基線漂是什么原因？怎么處理？ 4、柱子可以用NaOH溶液沖嗎？ph在那個(gè)范圍合適？估計(jì)是溶于堿性溶液的藥物進(jìn)液相后ph變化導(dǎo)致藥物洗出（可能性大嗎？）。 [ Last edited by 1289622 on 2012-1-15 at 12:27 ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
1289622(金幣+20, 博學(xué)EPI+1): 2012-02-15 15:36:31
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1、如果不加預(yù)柱的話，有是做生物基質(zhì)，是很容易堵塞柱頭的；乙腈黏度小，沖洗HPLC柱子時(shí)反映出柱壓就低！ 2、用什么沖取決于是什么物質(zhì)造成的堵塞，如果是鹽的話，可以用90%水甲醇溶液沖，建議先正沖；如果不行再反沖，你用的柱子粗，要用0.5ml/min以上流速?zèng)_，1-2個(gè)小時(shí)候，發(fā)現(xiàn)柱壓平穩(wěn)了， 就差不多了。 但要注意反沖后要正著再?zèng)_回來，就是至少90%的乙腈再多沖洗二十分鐘以上后再進(jìn)行測試！ 3、若你走等度，監(jiān)測220nm和254nm，肯定會(huì)看到220nm下的基線有點(diǎn)往下漂的，但是只要254nm下正常即可； 如果是MS的檢測器，依儀器型號，響應(yīng)在5次方到6次方都是正常的！ 4、NaOH溶液幾乎沒有用過！一般柱子的耐酸能力比耐堿強(qiáng)！ 看柱子的說明書，一般范圍是2-9的柱子就屬于較寬范圍了！堿性藥物你進(jìn)樣量少的話，對柱子也不會(huì)有太大影響！主要是流動(dòng)相的影響！ |
4樓2012-01-21 10:01:22
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5樓2012-01-30 12:01:07
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