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[求助]
細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，質(zhì)粒的設(shè)計(jì)
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小女子最近剛接觸質(zhì)粒。想請(qǐng)問(wèn)，以下問(wèn)題： 1，我想讓我的目的蛋白在細(xì)胞中表達(dá)的同時(shí)，同時(shí)表達(dá)GFP，在不表達(dá)目的蛋白時(shí)，不表達(dá)GFP，這樣的質(zhì)粒怎么設(shè)計(jì)？怎么選取質(zhì)粒？或者用別的載體？？ 2，目的蛋白在細(xì)胞中的總表達(dá)量不受改變。就是說(shuō)在以后的刺激試驗(yàn)中，該增加蛋白表達(dá)的時(shí)候增加，該減小的時(shí)候減小，不受轉(zhuǎn)染影響。 3，我希望能穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，建立永久的細(xì)胞系。 有沒(méi)有哪位大俠能幫我解答一下。沒(méi)坐過(guò)分子克隆方面的試驗(yàn)，一竅不通。謝謝指導(dǎo) |
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4樓2012-02-17 11:26:30
2樓2012-02-17 11:01:19
小周
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
susanuse(金幣+5): ★★★很有幫助 2012-02-17 12:54:40
小丹木木(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-02-17 13:43:42
susanuse(金幣+5): ★★★很有幫助 2012-02-17 12:54:40
小丹木木(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-02-17 13:43:42
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樓上說(shuō)的融合蛋白是一種方法。另外可以將兩個(gè)基因（GFP和目的基因）在一個(gè)質(zhì)粒中構(gòu)建，分別用自己的啟動(dòng)子和終止子。 目的蛋白的表達(dá)量不受改變，要建立穩(wěn)定的細(xì)胞株，大概耗時(shí)3-6個(gè)月的時(shí)間。還有你用的什么細(xì)胞有關(guān)。 |
3樓2012-02-17 11:16:56
5樓2012-02-17 11:28:34
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