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donnafeng金蟲 (小有名氣)
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[求助]
疏水性蛋白表達(dá)純化問題
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在做一個酶蛋白表達(dá)純化 這個蛋白疏水性很強 活性形式可能是二聚體或者四聚體形式 在表達(dá)過程中非常容易生成包涵體 采用0.1mM IPTG 16度過夜誘導(dǎo) 有部分可溶性表達(dá) 表達(dá)量還是不高 過ni柱純化以后 透析過程中非常容易產(chǎn)生沉淀 并且蛋白等電點預(yù)測在6.75 和ni柱操作時的的ph比較接近 看到萬金油buffer的帖子后嘗試用5%甘油保護(hù)透析時沉淀較少 但是甘油干擾酶活的測定 想請教 1 有沒有別的跟甘油效果差不多的保護(hù)劑可以用 2 想嘗試在培養(yǎng)基添加1%葡萄糖去除乳糖的影響 不知道葡萄糖要不要單獨滅菌 還是和培養(yǎng)基一起滅 聚體怎么操作 |
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2樓2012-02-17 17:51:00
donnafeng
金蟲 (小有名氣)
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3樓2012-02-21 10:32:36
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