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blueghost006新蟲 (初入文壇)
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[求助]
如何進一步純化這個蛋白？
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最近在純化一個蛋白~~但是總是會有雜帶啊~~~~不知道有什么方法可以將那些討厭的雜帶給弄掉~~~~另外，我純化出來去打抗體的~~~不知道就以這樣的水平可以打么？PS：最亮的是我的目的條帶~~~~ |
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2樓2011-07-16 15:00:04
3樓2011-07-16 15:52:36
blueghost006
新蟲 (初入文壇)
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，不知道各位大蝦有什么意見？ 4樓2011-07-17 13:27:39
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5樓2011-07-17 16:33:55
冼亮淀粉酶
專家顧問 (知名作家)
生物大分子降解酶
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【答案】應助回帖
★ ★ ★
amisking(金幣+3, EPI+1): 鼓勵應助 2011-07-17 19:11:45
amisking(金幣+3, EPI+1): 鼓勵應助 2011-07-17 19:11:45
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鎳柱雖然說也是親和層析，但是宿主菌可能有的蛋白質(zhì)里的組氨酸是連著有兩個或者3個的，也可以被吸附。你的洗脫梯度pH值變來變?nèi)サ�，結(jié)果通過改變pH值的方法不能達到純化，那就試一下改變咪唑梯度。一般來說20毫摩爾是洗去完全不能結(jié)合的蛋白質(zhì)，后面可以用50、100、150、200、250，這些梯度可以逐漸把非目的蛋白質(zhì)洗去。在這個過程中可能有兩個或者3個梯度都有目的蛋白質(zhì)被洗脫，但是其中有一個梯度是目的蛋白質(zhì)最多的，在這些梯度中，可能有一個梯度含有雜帶最少。最后的500毫摩爾是把蛋白質(zhì)全都洗掉的，可以保留這個梯度。 你先試一下咪唑梯度，應該會有更純的蛋白質(zhì)，但是如果用來做抗原就要更加純了，你現(xiàn)在的純度是不可能的。 如果還不純就再試一下其它純化方法，例如離子交換層析和疏水層析。如果還不行，鹽析和有機溶劑沉淀也可以考慮一下，不過就稍微麻煩些。 |
6樓2011-07-17 17:32:34
snoopyzxx
木蟲 (著名寫手)
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7樓2011-07-17 19:13:33
8樓2013-05-23 09:44:50
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