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blueghost006新蟲 (初入文壇)
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[求助]
如何進(jìn)一步純化這個(gè)蛋白？
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最近在純化一個(gè)蛋白~~但是總是會(huì)有雜帶啊~~~~不知道有什么方法可以將那些討厭的雜帶給弄掉~~~~另外，我純化出來(lái)去打抗體的~~~不知道就以這樣的水平可以打么？PS：最亮的是我的目的條帶~~~~ |
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冼亮淀粉酶
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking(金幣+3, EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-17 19:11:45
amisking(金幣+3, EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-17 19:11:45
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鎳柱雖然說(shuō)也是親和層析，但是宿主菌可能有的蛋白質(zhì)里的組氨酸是連著有兩個(gè)或者3個(gè)的，也可以被吸附。你的洗脫梯度pH值變來(lái)變?nèi)サ�，結(jié)果通過(guò)改變pH值的方法不能達(dá)到純化，那就試一下改變咪唑梯度。一般來(lái)說(shuō)20毫摩爾是洗去完全不能結(jié)合的蛋白質(zhì)，后面可以用50、100、150、200、250，這些梯度可以逐漸把非目的蛋白質(zhì)洗去。在這個(gè)過(guò)程中可能有兩個(gè)或者3個(gè)梯度都有目的蛋白質(zhì)被洗脫，但是其中有一個(gè)梯度是目的蛋白質(zhì)最多的，在這些梯度中，可能有一個(gè)梯度含有雜帶最少。最后的500毫摩爾是把蛋白質(zhì)全都洗掉的，可以保留這個(gè)梯度。 你先試一下咪唑梯度，應(yīng)該會(huì)有更純的蛋白質(zhì)，但是如果用來(lái)做抗原就要更加純了，你現(xiàn)在的純度是不可能的。 如果還不純就再試一下其它純化方法，例如離子交換層析和疏水層析。如果還不行，鹽析和有機(jī)溶劑沉淀也可以考慮一下，不過(guò)就稍微麻煩些。 |
6樓2011-07-17 17:32:34
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