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冰凝東金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
雙酶切(Kpn1/BamH1)T-Simple載體,沒(méi)有得到目的條帶……
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將目的基因連接到了pMD18-T-Simple載體上,挑單克隆提取了質(zhì)粒,目的基因的酶切位點(diǎn)是Kpn1和BamH1,今日對(duì)所提質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切,所用酶是TaKaRa的,體系如下:10×K Buffer 1μ, 質(zhì)粒 15μ, Kpn1 1μ, BamH1 1μ, ddH2O 2μ 37℃雙酶切過(guò)夜,凝膠檢測(cè)沒(méi)有目的條帶……目的條帶750bp。年前同樣體系雙酶切其他基因沒(méi)有問(wèn)題! 小弟新人,金幣不多,希望能得到建設(shè)性意見(jiàn)…… |
金蟲(chóng) (小有名氣)
至尊木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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試著分析了幾個(gè)原因,僅供參考 1、你確定你的目的基因已經(jīng)在質(zhì)粒載體上了? 2、不知道在這個(gè)載體中,兩個(gè)酶切位點(diǎn)離得遠(yuǎn)不遠(yuǎn),如果較近的話可能切不開(kāi),可以試試分別單酶切。 3、這個(gè)可能性比較低,就是酶有沒(méi)有失活,可做一次對(duì)照。 |

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