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沁雪飄逸新蟲 (小有名氣)
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[求助]
怎么測定氨基氮的轉(zhuǎn)化率?
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怎么測定氨基氮的轉(zhuǎn)化率?求方法? 月桂酰氯與多肽聚合物反應(yīng)后怎么測定其轉(zhuǎn)化率?我想測定氨基氮的轉(zhuǎn)化率,可是暫時沒想到方法,求解? |
新蟲 (小有名氣)
銀蟲 (正式寫手)
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氨氮測定 (發(fā)酵液中氨氮含量通過酚-次氯酸法) (1)容器的清洗:所有配制試劑的容器都用重鉻酸鉀洗液浸洗后清水沖洗干凈,并用去離子水潤洗三次烘干。 (2)試劑的配制:所有試劑都用超純水配制。 試劑A:苯酚10 g/L,亞硝基鐵氰化鈉•2H2O 100 mg/L,37℃時實測pH為7.5-7.8。4℃避光可存30天以上。 試劑B-Ⅰ:緩沖溶液體系分別含有0.4 M Na2HPO4和0.2 M NaOH,37℃時實測pH為11.5-11.6。室溫存放不超過60天。 試劑B-Ⅱ:以NaClO成品溶液(標(biāo)示活性氯≥5.2%)配制NaOH溶液。NaOH含量為 2 mol/L。 試劑B:試劑B-Ⅱ:試劑B-Ⅰ=1:100 (v/v), 37℃時實測pH約為11.50-11.70,混合搖勻備用,配置后于4℃可保存14天。 銨標(biāo)準(zhǔn)液貯存液:稱取3.819 g經(jīng)100oC干燥過的優(yōu)級純氯化銨溶解于水中,移入1000 mL容量瓶中,稀釋至標(biāo)線(溶液濃度為 1.00 mg氨基氮/mL)。 (3)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 將銨標(biāo)準(zhǔn)貯存液進(jìn)行一系列稀釋,分別為100倍、50倍、40倍、20倍、10倍。依次加入20 μL標(biāo)準(zhǔn)溶液(系列濃度梯度稀釋后),2.5 mL的試劑A和2.5 mL的試劑B,10s內(nèi)立即搖勻,于37oC水浴中保溫30 min,取出于630nm處比色測定,蒸餾水調(diào)零(20 min內(nèi)完成全部測定)。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。如圖2.1,在氨氮檢測劑量0-2 μg內(nèi),氨氮含量和A630nm間有很好的線性相關(guān)性。 標(biāo)樣濃度(N mg/mL) 0 0.01 0.02 0.025 0.05 0.1 1 取液量(定容10mL) 0 0.1 0.2 0.25 0.5 1 10 標(biāo)品測定量(µg) 0 1 4 6.25 25 100 10000 A630nm 以標(biāo)品測定量(µg)為橫坐標(biāo),對應(yīng)的吸光值A(chǔ)630nm為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并回歸如下方程式: Y=AX+B,其中R2應(yīng)大于0.99。 (4)樣品測定 將待測樣品于10,000×g 4°C離心5 min,取無油脂上清液進(jìn)行測定。 根據(jù)待測樣品中大概氨氮含量,對樣品系列稀釋(稀釋倍數(shù)n為1,10,100,1000)。于試管中依次加入20 μL樣品稀釋液,2.5 mL的試劑A和2.5 mL的試劑B,10s內(nèi)立即搖勻,于37oC水浴中保溫30-50 min,取出于630 nm處比色測定,蒸餾水調(diào)零?瞻讟悠坊旌弦何庵祽(yīng)為0.010-0.040(這決定于所用試劑的質(zhì)量以及蒸餾水的純度)。計算公式如下所示: 其中,AN為樣品中的氨氮濃度(g/L);n為樣品稀釋倍數(shù),A630 nm為樣品在630 nm下的吸光值,A和 B為標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸公式中的系數(shù)。當(dāng)A630 nm測定數(shù)值在0.08-0.8范圍所對應(yīng)的稀釋倍數(shù)為有效稀釋倍數(shù),如不在此范圍內(nèi)可調(diào)節(jié)樣品的稀釋倍數(shù),使測量值在此范圍內(nèi))。 |
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