 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 4156 | 回復: 20 | ||
| 本帖產生 1 個 MolEPI ，點擊這里進行查看 | ||
nan_nan_2012新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
為什么最近做連接轉化總是失敗
|
|
| 本人最近用TaKaRa的pMD18-T Vector做連接轉化，感受態(tài)用過自己做的和別人做的都不長菌落，也用過買的感受態(tài)，只長了不到10個菌落挑單克隆后做菌液PCR檢測發(fā)現(xiàn)都是空載，請問是什么原因？請各位高手指教一下��！謝啦�。ㄎ业幕厥债a物大小在600~700bp之間，回收產物4ul，載體1ul，SolutionI 5ul，16°C連接1h） |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有255人回復
-
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 做酶切連接后轉化再提質粒，質粒明顯變小，Why???
已經有24人回復
- BAC文庫連接轉化
已經有22人回復
- 為什么連接這么難呢？
已經有54人回復
- 【求助/交流】關于重組質粒的構建，總是失敗，希望高手指點一下啊～～
已經有16人回復
- 【求助/交流】連接幾次，仍然不見菌落出現(xiàn)
已經有15人回復
- 【求助/交流】連接轉化長菌有質粒，但是沒有目的片段，怎么回事？？
已經有20人回復
- 【求助/交流】連接總是連不上，如何解決
已經有10人回復
- 【求助/交流】關于平末端連接
已經有25人回復
- 【求助/交流】連接表達載體PET-28A失敗原因
已經有23人回復
wanhscn(金幣+2): 有道理！ 2012-02-25 15:53:05
西瓜: 回帖置頂 2012-02-25 19:20:18
西瓜: 回帖置頂 2012-02-25 19:20:18
|
本帖內容被屏蔽 |
4樓2012-02-24 20:22:24
【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數 +1
小丹木木(金幣+3, MolEPI+1): 很有用哦 2012-02-27 10:50:18
小丹木木(金幣+3, MolEPI+1): 很有用哦 2012-02-27 10:50:18
|
1、可以先用感受態(tài)轉質�？纯� 檢查下是不是感受態(tài)的問題 2、新倒一批板 排除板的問題 3、連接比例 如果我沒記錯的話 應該是 （載體用量 如：100ng）/載體堿基數：T載大�。�/（片段用量/片段堿基數600bp)=1:3 這個公式算一下（應該是的 建議你查一下 我經常會把兩個比例記反） 4、你應該是用Taq酶P的吧 不是的話記得要加A~~~ 5、連接時間 我一般都是4°過夜的 如果樓主不急 就延長一下連接時間吧 6、多轉一點吧 雖然我也是轉的10微升 你就轉20好了 TaKaRa的pMD18-T Vector我一直在用 覺得很好用 很好構的 建議樓主在連接的時候可以把載體片段的量多做幾管 不同比例 然后分別轉化 看看會不會好一點 希望對你有幫助 |
12樓2012-02-26 01:05:39
angie8610
鐵蟲 (小有名氣)
- 應助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 2682.7
- 散金: 4
- 紅花: 1
- 帖子: 195
- 在線: 57.8小時
- 蟲號: 1289033
- 注冊: 2011-05-08
- 性別: MM
- 專業(yè): 動物遺傳學
2樓2012-02-24 14:58:03
nan_nan_2012
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 5.5
- 帖子: 16
- 在線: 7.3小時
- 蟲號: 1637341
- 注冊: 2012-02-23
- 專業(yè): 細胞增殖、生長與分化
3樓2012-02-24 18:53:13
eagle00768
木蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 1
- 應助: 13 (小學生)
- 金幣: 2301.1
- 紅花: 4
- 帖子: 197
- 在線: 75.5小時
- 蟲號: 972676
- 注冊: 2010-03-16
- 性別: MM
- 專業(yè): 植物遺傳學
5樓2012-02-25 13:07:11
lillian菲
銀蟲 (小有名氣)
- 應助: 22 (小學生)
- 金幣: 1474.2
- 紅花: 3
- 帖子: 74
- 在線: 29.3小時
- 蟲號: 1642017
- 注冊: 2012-02-25
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學
6樓2012-02-25 13:55:47
nan_nan_2012
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 5.5
- 帖子: 16
- 在線: 7.3小時
- 蟲號: 1637341
- 注冊: 2012-02-23
- 專業(yè): 細胞增殖、生長與分化
7樓2012-02-25 16:17:32
nan_nan_2012
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 5.5
- 帖子: 16
- 在線: 7.3小時
- 蟲號: 1637341
- 注冊: 2012-02-23
- 專業(yè): 細胞增殖、生長與分化
8樓2012-02-25 16:43:44
eagle00768
木蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 1
- 應助: 13 (小學生)
- 金幣: 2301.1
- 紅花: 4
- 帖子: 197
- 在線: 75.5小時
- 蟲號: 972676
- 注冊: 2010-03-16
- 性別: MM
- 專業(yè): 植物遺傳學
9樓2012-02-25 16:55:55
eagle00768
木蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 1
- 應助: 13 (小學生)
- 金幣: 2301.1
- 紅花: 4
- 帖子: 197
- 在線: 75.5小時
- 蟲號: 972676
- 注冊: 2010-03-16
- 性別: MM
- 專業(yè): 植物遺傳學
10樓2012-02-25 16:57:43
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 nan_nan_2012 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿蘇州大學材料工程（085601）專碩有科研經歷三項國獎兩個實用型專利一項省級立項 +3 | 大火山小火山 2026-03-16 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 304求調劑 +4 | ahbd 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
[考研] 一志愿211 0703方向310分求調劑 +3 | 努力奮斗112 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學調劑 ，六級已過，有科研經歷 +7 | 曦熙兮 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 321求調劑 +5 | 大米飯！ 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 311求調劑 +5 | 26研0 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070303 總分349求調劑 +3 | LJY9966 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 277材料科學與工程080500求調劑 +3 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22408總分284求調劑 +3 | InAspic 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 297一志愿上交085600求調劑 +5 | 指尖八千里 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 學碩285求調劑 +13 | Wisjxn 2026-03-12 | 46/2300 |
|
|
|
[考研] 271求調劑 +10 | 生如夏花… 2026-03-11 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中農業(yè)大學071010，總分三百二,求調劑 +3 | 困困困困坤坤 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 301求調劑 +6 | Liyouyumairs 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0856化學工程280分求調劑 +4 | shenzxsn 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 274求調劑0856材料化工 +12 | z2839474511 2026-03-11 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 研究生招生 +3 | 徐海濤11 2026-03-10 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 讀博申請 +5 | 感dd 2026-03-10 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 290求調劑 +3 | 柯淮然 2026-03-10 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085602化工求調劑 +7 | 董boxing 2026-03-10 | 7/350 |
|