 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 4160 | 回復(fù): 20 | ||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||
nan_nan_2012新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
為什么最近做連接轉(zhuǎn)化總是失敗
|
|
| 本人最近用TaKaRa的pMD18-T Vector做連接轉(zhuǎn)化，感受態(tài)用過自己做的和別人做的都不長菌落，也用過買的感受態(tài)，只長了不到10個菌落挑單克隆后做菌液PCR檢測發(fā)現(xiàn)都是空載，請問是什么原因？請各位高手指教一下！！謝啦！（我的回收產(chǎn)物大小在600~700bp之間，回收產(chǎn)物4ul，載體1ul，SolutionI 5ul，16°C連接1h） |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有278人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 做酶切連接后轉(zhuǎn)化再提質(zhì)粒，質(zhì)粒明顯變小，Why???
已經(jīng)有24人回復(fù)
- BAC文庫連接轉(zhuǎn)化
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 為什么連接這么難呢？
已經(jīng)有54人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于重組質(zhì)粒的構(gòu)建，總是失敗，希望高手指點(diǎn)一下啊～～
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助/交流】連接幾次，仍然不見菌落出現(xiàn)
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 【求助/交流】連接轉(zhuǎn)化長菌有質(zhì)粒，但是沒有目的片段，怎么回事？？
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 【求助/交流】連接總是連不上，如何解決
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于平末端連接
已經(jīng)有25人回復(fù)
- 【求助/交流】連接表達(dá)載體PET-28A失敗原因
已經(jīng)有23人回復(fù)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木(金幣+3, MolEPI+1): 很有用哦 2012-02-27 10:50:18
小丹木木(金幣+3, MolEPI+1): 很有用哦 2012-02-27 10:50:18
|
1、可以先用感受態(tài)轉(zhuǎn)質(zhì)�？纯� 檢查下是不是感受態(tài)的問題 2、新倒一批板 排除板的問題 3、連接比例 如果我沒記錯的話 應(yīng)該是 （載體用量 如：100ng）/載體堿基數(shù)：T載大�。�/（片段用量/片段堿基數(shù)600bp)=1:3 這個公式算一下（應(yīng)該是的 建議你查一下 我經(jīng)常會把兩個比例記反） 4、你應(yīng)該是用Taq酶P的吧 不是的話記得要加A~~~ 5、連接時間 我一般都是4°過夜的 如果樓主不急 就延長一下連接時間吧 6、多轉(zhuǎn)一點(diǎn)吧 雖然我也是轉(zhuǎn)的10微升 你就轉(zhuǎn)20好了 TaKaRa的pMD18-T Vector我一直在用 覺得很好用 很好構(gòu)的 建議樓主在連接的時候可以把載體片段的量多做幾管 不同比例 然后分別轉(zhuǎn)化 看看會不會好一點(diǎn) 希望對你有幫助 |
12樓2012-02-26 01:05:39
wanhscn(金幣+2): 有道理！ 2012-02-25 15:53:05
西瓜: 回帖置頂 2012-02-25 19:20:18
西瓜: 回帖置頂 2012-02-25 19:20:18
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2012-02-24 20:22:24
angie8610
鐵蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 2682.7
- 散金: 4
- 紅花: 1
- 帖子: 195
- 在線: 57.8小時
- 蟲號: 1289033
- 注冊: 2011-05-08
- 性別: MM
- 專業(yè): 動物遺傳學(xué)
2樓2012-02-24 14:58:03
nan_nan_2012
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 5.5
- 帖子: 16
- 在線: 7.3小時
- 蟲號: 1637341
- 注冊: 2012-02-23
- 專業(yè): 細(xì)胞增殖、生長與分化
3樓2012-02-24 18:53:13
eagle00768
木蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
- 金幣: 2301.1
- 紅花: 4
- 帖子: 197
- 在線: 75.5小時
- 蟲號: 972676
- 注冊: 2010-03-16
- 性別: MM
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
5樓2012-02-25 13:07:11
lillian菲
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
- 金幣: 1474.2
- 紅花: 3
- 帖子: 74
- 在線: 29.3小時
- 蟲號: 1642017
- 注冊: 2012-02-25
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學(xué)
6樓2012-02-25 13:55:47
nan_nan_2012
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 5.5
- 帖子: 16
- 在線: 7.3小時
- 蟲號: 1637341
- 注冊: 2012-02-23
- 專業(yè): 細(xì)胞增殖、生長與分化
7樓2012-02-25 16:17:32
nan_nan_2012
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 5.5
- 帖子: 16
- 在線: 7.3小時
- 蟲號: 1637341
- 注冊: 2012-02-23
- 專業(yè): 細(xì)胞增殖、生長與分化
8樓2012-02-25 16:43:44
eagle00768
木蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
- 金幣: 2301.1
- 紅花: 4
- 帖子: 197
- 在線: 75.5小時
- 蟲號: 972676
- 注冊: 2010-03-16
- 性別: MM
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
9樓2012-02-25 16:55:55
eagle00768
木蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
- 金幣: 2301.1
- 紅花: 4
- 帖子: 197
- 在線: 75.5小時
- 蟲號: 972676
- 注冊: 2010-03-16
- 性別: MM
- 專業(yè): 植物遺傳學(xué)
10樓2012-02-25 16:57:43
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 nan_nan_2012 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +3 | 困于星晨 2026-03-17 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料專碩306英一數(shù)二 +6 | z1z2z3879 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八旬速覽 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)，080500材料科學(xué)與工程，調(diào)劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +3 | 是Lupa啊 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 294求調(diào)劑 +3 | Zys010410@ 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工（0856）304求B區(qū)調(diào)劑 +6 | 邱gl 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑 +4 | 番茄頭--- 2026-03-10 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 285 求調(diào)劑 資源與環(huán)境 一志愿北京化工大學(xué) +3 | 未名考生 2026-03-10 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料371求調(diào)劑 +9 | 鱷魚? 2026-03-11 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科院，化學(xué)方向，295求調(diào)劑 +4 | 一氧二氮 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +5 | 是Lupa啊 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，材料專碩317求調(diào)劑 +5 | lx8568 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 7712b 2026-03-13 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 四川大學(xué)085601材料工程專碩 初試294求調(diào)劑 +4 | 祝我們好在冬天 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] （081700）化學(xué)工程與技術(shù)-298分求調(diào)劑 +12 | 11啦啦啦 2026-03-11 | 35/1750 |
|
|
|
[考研] 277求調(diào)劑 +4 | anchor17 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑0856材料化工 +12 | z2839474511 2026-03-11 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑（食品/專碩） +3 | xc321 2026-03-12 | 6/300 |
|