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nan_nan_2012新蟲 (初入文壇)
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[求助]
為什么最近做連接轉(zhuǎn)化總是失敗
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| 本人最近用TaKaRa的pMD18-T Vector做連接轉(zhuǎn)化，感受態(tài)用過自己做的和別人做的都不長菌落，也用過買的感受態(tài)，只長了不到10個(gè)菌落挑單克隆后做菌液PCR檢測發(fā)現(xiàn)都是空載，請問是什么原因？請各位高手指教一下！！謝啦�。ㄎ业幕厥债a(chǎn)物大小在600~700bp之間，回收產(chǎn)物4ul，載體1ul，SolutionI 5ul，16°C連接1h） |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木(金幣+3, MolEPI+1): 很有用哦 2012-02-27 10:50:18
小丹木木(金幣+3, MolEPI+1): 很有用哦 2012-02-27 10:50:18
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1、可以先用感受態(tài)轉(zhuǎn)質(zhì)�？纯� 檢查下是不是感受態(tài)的問題 2、新倒一批板 排除板的問題 3、連接比例 如果我沒記錯(cuò)的話 應(yīng)該是 （載體用量 如：100ng）/載體堿基數(shù)：T載大�。�/（片段用量/片段堿基數(shù)600bp)=1:3 這個(gè)公式算一下（應(yīng)該是的 建議你查一下 我經(jīng)常會把兩個(gè)比例記反） 4、你應(yīng)該是用Taq酶P的吧 不是的話記得要加A~~~ 5、連接時(shí)間 我一般都是4°過夜的 如果樓主不急 就延長一下連接時(shí)間吧 6、多轉(zhuǎn)一點(diǎn)吧 雖然我也是轉(zhuǎn)的10微升 你就轉(zhuǎn)20好了 TaKaRa的pMD18-T Vector我一直在用 覺得很好用 很好構(gòu)的 建議樓主在連接的時(shí)候可以把載體片段的量多做幾管 不同比例 然后分別轉(zhuǎn)化 看看會不會好一點(diǎn) 希望對你有幫助 |
12樓2012-02-26 01:05:39
angie8610
鐵蟲 (小有名氣)
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2樓2012-02-24 14:58:03
nan_nan_2012
新蟲 (初入文壇)
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3樓2012-02-24 18:53:13
wanhscn(金幣+2): 有道理！ 2012-02-25 15:53:05
西瓜: 回帖置頂 2012-02-25 19:20:18
西瓜: 回帖置頂 2012-02-25 19:20:18
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4樓2012-02-24 20:22:24
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