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liufeifeia銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
組氨酸標(biāo)簽重組蛋白純化
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用GE的1ml HisTrap HP 純化的，binding buffer （pH7.0 25mM Tris-HCl 0.5MNaCl) 結(jié)合后，用250mM咪唑10CV線性洗脫，得到3個(gè)洗脫峰，洗脫峰1和2有交集，洗脫峰3單獨(dú)的一個(gè)峰，然后超濾離心管稍微濃縮了一下跑SDS-PAGE。 1、按理說峰3應(yīng)該是我的目的蛋白，可是檢測(cè)酶活性峰2活性很高，峰3很微弱的活性，這是怎么回事？我哪里出錯(cuò)了嗎？ 2、后來不知道是不是柱子結(jié)合效率低了，怎么都跑不出第三個(gè)峰，檢測(cè)只有穿透峰有酶活，洗脫峰沒有酶活。 請(qǐng)各位大俠指教..... lane1：marker lane2：破碎液 lane3：穿透峰 lane4：洗脫峰1 lane5：洗脫峰2 lane6：洗峰脫3 |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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