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loveskyzhou鐵蟲 (正式寫手)
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想給自己的蛋白加個(gè)HIS標(biāo)簽？方法。。。。
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自己有個(gè)重組質(zhì)粒，帶GST標(biāo)簽的蛋白，GST是質(zhì)粒自身帶的。能不能想個(gè)辦法不要GST標(biāo)簽而換成HIS呢？ 還有his標(biāo)簽怎么加？？ 我只想到了換種質(zhì)粒。。。。 |
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你要是只是為了要His tag純化用，那就用引物帶上去，或者再帶個(gè)蛋白酶切位點(diǎn)。即GST-（enzyme site-his）-protein。 要是就不要GST，那有pET載體，當(dāng)然換質(zhì)粒最容易。 非要在這個(gè)載體上替換的話。GST前面有BspmI酶切位點(diǎn) 覺(jué)得這個(gè)酶切位點(diǎn)不好用，那就再向上找，PCR把質(zhì)粒上的片段和目的基因拼上去再連接。 當(dāng)然也可以把質(zhì)粒除了GST都P出來(lái)，然后和目的基因連接。 再或者自己把啟動(dòng)子RBS基因一起做出來(lái)，然后連到載體上。相當(dāng)于設(shè)計(jì)個(gè)和GST共表達(dá)的載體。 |
9樓2011-08-15 13:37:10
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