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吉林農(nóng)大木蟲 (小有名氣)
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[交流]
如何在蛋白純化后去除6組氨酸(6His)標(biāo)簽 已有13人參與
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 為了對(duì)表達(dá)的蛋白進(jìn)行后期純化,就連入了相應(yīng)的6組氨酸標(biāo)簽,這個(gè)標(biāo)簽與蛋白之間是如何接合的呢(Linker還是直接融合),接合后在蛋白過柱純化時(shí),又是如何得到?jīng)]有6組氨酸標(biāo)簽的目的蛋白呢!這些問題,大家是怎么考慮的呢!因?yàn)橛械臅r(shí)候表達(dá)一種蛋白是要考慮到其空間構(gòu)象的變化的,所以在表達(dá)成功后,一定要去除上面本來沒有的東東,標(biāo)簽就是一個(gè)例子! [ Last edited by 吉林農(nóng)大 on 2012-2-23 at 01:11 ] |
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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lxj341401
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2樓2012-02-23 07:46:00
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| 6組氨酸標(biāo)簽與目的蛋白的基因之間構(gòu)建酶切位點(diǎn)，比如凝血酶的酶切位點(diǎn)，在用Ni-NTA樹脂螯合目的蛋白質(zhì)后不用咪唑洗，而直接用凝血酶（thrombin）加緩沖溶液切割6組氨酸標(biāo)簽與目的蛋白的酶切位點(diǎn)，這樣洗脫下來的就是沒有6組氨酸標(biāo)簽的目的蛋白質(zhì)。凝血酶（thrombin）的酶切位點(diǎn)：基因工程表達(dá)系統(tǒng)中融合蛋白常用的連接序列，凝血酶處理可將融合蛋白中目的蛋白與非目的蛋白的肽段分離，最適切割位點(diǎn)是：P4-P3-P2-Arg↓-P1′-P2′，式中P4和P3為疏水氨基酸，P1′和P2′為非酸性氨基酸，↓為切割位點(diǎn)。 |
13樓2013-06-27 23:50:32
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10樓2012-02-28 12:29:50
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