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jm0305100303新蟲 (小有名氣)
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已經(jīng)帶his標(biāo)簽?zāi)康牡鞍谆蛉绾卧O(shè)計(jì)引物啊（目的基因已經(jīng)接在pET-22b的載體上了）
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分子生物學(xué)的新手，正學(xué)習(xí)設(shè)計(jì)引物，向各位大俠求助啊…… 利用pET-22b的重組質(zhì)粒去pcr，希望得到帶組氨酸標(biāo)簽的目的蛋白基因，因?yàn)榻M氨酸標(biāo)簽用的是CAC，所以設(shè)計(jì)出來(lái)的引物GC%偏高（66.7%），Tm值79.2(上游引物的tm值才56.7，差20多度……)，引物里面就是保護(hù)堿基（3bp）+酶切位點(diǎn)（6bp）+終止密碼子（3bp）+5個(gè)GTG（15bp）的重復(fù)，一共27個(gè)bp，不知道這樣的引物能不能p出目的基因來(lái)啊，如果能p出來(lái)，退火溫度應(yīng)該用多少呢？ [ Last edited by jm0305100303 on 2011-9-19 at 13:09 ] |
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