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倔強(qiáng)的投手新蟲 (小有名氣)
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如何設(shè)計(jì)引物,擴(kuò)增目的基因的ORF?
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最近要做基因克隆,擴(kuò)增基因的ORF 現(xiàn)在已經(jīng)通過軟件找到該基因的CDS和ORF mRNA:23423-24558 CDS:23423-24412 ORF:23423-24412 該基因是沒有內(nèi)含子的基因 我現(xiàn)在要以cDNA為模板 設(shè)計(jì)引物將此段基因擴(kuò)增出來 從目前的情況來看,3'端得引物可能比較好設(shè)計(jì) 因?yàn)镃DS后還有一段序列 而CDS的5'端前面已經(jīng)沒有其他的序列了 這樣的話設(shè)計(jì)引物就要從第一個(gè)核苷酸開始 我用Primer 5看了一下,5‘端根本沒有合適的引物 會(huì)形成比較穩(wěn)定的發(fā)卡結(jié)構(gòu) 我想問的是,這種情況應(yīng)該如何解決,應(yīng)該怎樣設(shè)計(jì)引物將此段擴(kuò)增出來? |
至尊木蟲 (著名寫手)
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