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Jocal鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于設(shè)計(jì)GFP的引物設(shè)計(jì)問(wèn)題。專(zhuān)家請(qǐng)入內(nèi)
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我想設(shè)計(jì)一個(gè)GFP引物(用于pET32a質(zhì)粒載體)。想在引物上游引入Xho I 酶切位點(diǎn),下游引入Ava I 酶切位點(diǎn)。也可上下游都用同一個(gè)酶切位點(diǎn)。但就想在這兩個(gè)酶中選(因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室條件有限,只有這兩種酶)。 用primer premier5 搞了一兩星期了,。至今沒(méi)有設(shè)計(jì)出合適的引物,。因時(shí)間上的迫切,還望各位高手指點(diǎn),幫忙。 |

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

新蟲(chóng) (小有名氣)
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我用的引物是 保護(hù)堿基 酶切位點(diǎn) 與模板配對(duì)部分 下游 cgc gagctc ttacttgta cag ctc gtc 下游引物不好意思找不到了 因?yàn)閿U(kuò)GFP的ORF,只能在起始密碼子和終止密碼子那設(shè)計(jì),酶切位點(diǎn)固定了,只需在與模板配對(duì)部分調(diào)整,什么樣的酶且位點(diǎn)用什么保護(hù)堿基網(wǎng)上查得到,所以盡可大膽的設(shè)計(jì)合成出來(lái),到時(shí)候跑個(gè)梯度就行了, |
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