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Jocal鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于設(shè)計(jì)ＧＦＰ的引物設(shè)計(jì)問(wèn)題。專家請(qǐng)入內(nèi)
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我想設(shè)計(jì)一個(gè)GFP引物（用于pET32a質(zhì)粒載體）。想在引物上游引入Xho I 酶切位點(diǎn)，下游引入Ava I 酶切位點(diǎn)。也可上下游都用同一個(gè)酶切位點(diǎn)。但就想在這兩個(gè)酶中選（因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室條件有限，只有這兩種酶）。 用primer premier5 搞了一兩星期了，。至今沒(méi)有設(shè)計(jì)出合適的引物，。因時(shí)間上的迫切，還望各位高手指點(diǎn)，幫忙。   |
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鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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3樓2011-07-26 23:11:06
空谷幽風(fēng)
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2樓2011-07-26 20:25:27
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【答案】應(yīng)助回帖
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dhd997(金幣+3): 鼓勵(lì)經(jīng)驗(yàn)交流 2011-07-30 13:25:32
dhd997(金幣+3): 鼓勵(lì)經(jīng)驗(yàn)交流 2011-07-30 13:25:32
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我用的引物是 保護(hù)堿基 酶切位點(diǎn) 與模板配對(duì)部分 下游 cgc gagctc ttacttgta cag ctc gtc 下游引物不好意思找不到了 因?yàn)閿U(kuò)GFP的ORF,只能在起始密碼子和終止密碼子那設(shè)計(jì)，酶切位點(diǎn)固定了，只需在與模板配對(duì)部分調(diào)整，什么樣的酶且位點(diǎn)用什么保護(hù)堿基網(wǎng)上查得到，所以盡可大膽的設(shè)計(jì)合成出來(lái)，到時(shí)候跑個(gè)梯度就行了， |
4樓2011-07-27 10:11:32
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