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倔強(qiáng)的投手新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
如何設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增目的基因的ORF？
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最近要做基因克隆，擴(kuò)增基因的ORF 現(xiàn)在已經(jīng)通過(guò)軟件找到該基因的CDS和ORF mRNA：23423-24558 CDS：23423-24412 ORF：23423-24412 該基因是沒(méi)有內(nèi)含子的基因 我現(xiàn)在要以cDNA為模板 設(shè)計(jì)引物將此段基因擴(kuò)增出來(lái) 從目前的情況來(lái)看，3'端得引物可能比較好設(shè)計(jì) 因?yàn)镃DS后還有一段序列 而CDS的5'端前面已經(jīng)沒(méi)有其他的序列了 這樣的話設(shè)計(jì)引物就要從第一個(gè)核苷酸開(kāi)始 我用Primer 5看了一下，5‘端根本沒(méi)有合適的引物 會(huì)形成比較穩(wěn)定的發(fā)卡結(jié)構(gòu) 我想問(wèn)的是，這種情況應(yīng)該如何解決，應(yīng)該怎樣設(shè)計(jì)引物將此段擴(kuò)增出來(lái)？ |
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4樓2011-06-27 10:21:53
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