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如何設(shè)計引物，擴增目的基因的ORF？
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最近要做基因克隆，擴增基因的ORF 現(xiàn)在已經(jīng)通過軟件找到該基因的CDS和ORF mRNA：23423-24558 CDS：23423-24412 ORF：23423-24412 該基因是沒有內(nèi)含子的基因 我現(xiàn)在要以cDNA為模板 設(shè)計引物將此段基因擴增出來 從目前的情況來看，3'端得引物可能比較好設(shè)計 因為CDS后還有一段序列 而CDS的5'端前面已經(jīng)沒有其他的序列了 這樣的話設(shè)計引物就要從第一個核苷酸開始 我用Primer 5看了一下，5‘端根本沒有合適的引物 會形成比較穩(wěn)定的發(fā)卡結(jié)構(gòu) 我想問的是，這種情況應(yīng)該如何解決，應(yīng)該怎樣設(shè)計引物將此段擴增出來？ |
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lxj341401
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