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jm0305100303新蟲 (小有名氣)
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[求助]
已經帶his標簽目的蛋白基因如何設計引物啊（目的基因已經接在pET-22b的載體上了）
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分子生物學的新手，正學習設計引物，向各位大俠求助啊…… 利用pET-22b的重組質粒去pcr，希望得到帶組氨酸標簽的目的蛋白基因，因為組氨酸標簽用的是CAC，所以設計出來的引物GC%偏高（66.7%），Tm值79.2(上游引物的tm值才56.7，差20多度……)，引物里面就是保護堿基（3bp）+酶切位點（6bp）+終止密碼子（3bp）+5個GTG（15bp）的重復，一共27個bp，不知道這樣的引物能不能p出目的基因來啊，如果能p出來，退火溫度應該用多少呢？ [ Last edited by jm0305100303 on 2011-9-19 at 13:09 ] |
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5樓2011-09-20 20:55:36
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