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1985ming1985新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
原核同時(shí)表達(dá)兩個(gè)蛋白，需要自行給其中一個(gè)加標(biāo)簽，請(qǐng)教了�。�！
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| 我現(xiàn)在要用PQE30同時(shí)表達(dá)一個(gè)基因座上的兩個(gè)基因，A和B，他們兩個(gè)之間還有一段GAP，轉(zhuǎn)錄方向是從B向A，用PQE30表達(dá)之后，B蛋白的N末端有組氨酸標(biāo)簽 ，但是A什么都沒(méi)有，所以就提取不出來(lái)（這部分已經(jīng)做過(guò)了，的確可以同時(shí)表達(dá)），我就想在A的C末端加組氨酸標(biāo)簽，在反向引物中加了六個(gè)GTG（對(duì)應(yīng)于正向的就是CAC，應(yīng)該就是組氨酸的密碼子），這樣PCR之后就可以把組氨酸標(biāo)簽加在A的C末端，請(qǐng)問(wèn)各位大俠這樣成嘛？ |
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2樓2011-04-29 23:55:52
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3樓2011-04-30 13:35:29
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加了之后的引物我做了PCR，克隆測(cè)序爭(zhēng)取，酶切于PQE30鏈接，轉(zhuǎn)入M15做誘導(dǎo)表達(dá)，昨晚第一次誘導(dǎo)沒(méi)有結(jié)果，很奇怪，沒(méi)加標(biāo)簽之前做的那次表達(dá)顯示兩個(gè)蛋白都表達(dá)了，現(xiàn)在只是在末尾加了六個(gè)組氨酸標(biāo)簽就什么都沒(méi)有表達(dá)，覺(jué)得很奇怪，測(cè)序正確，同樣操作后就不會(huì)出現(xiàn)移碼突變，加的是六個(gè)組氨酸標(biāo)簽?zāi)蔷褪?個(gè)氨基酸，也不會(huì)引移碼突變。奇怪了。 請(qǐng)問(wèn)您做原核誘導(dǎo)的時(shí)候有沒(méi)有遇見(jiàn)這種不存在移碼突變但是還無(wú)法表達(dá)的？通過(guò)什么方法有可能使蛋白表達(dá)？ |
4樓2011-04-30 14:11:14
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5樓2011-04-30 16:09:09
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