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zhougang110銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
地衣芽孢桿菌的基因敲除到底如何做�。�
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 本人想在地衣芽孢桿菌里敲除一個基因，在新霉素抗性基因兩端連接了基因的上下游同源臂，此片段電轉(zhuǎn)入地衣芽孢桿菌的感受態(tài)里，可是怎么也長不出來轉(zhuǎn)化子？新霉素篩選平板的濃度為50ppm。哪位蟲友做過相關(guān)的實驗？能否給俺指點一下？謝謝！ |
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zhaohq1209
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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amisking(金幣+2): 鼓勵積極應(yīng)助！ 2012-03-05 18:30:17
zhougang110: 金幣+5, ★有幫助 2012-04-08 08:33:56
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zhougang110: 金幣+5, ★有幫助 2012-04-08 08:33:56
| lz用的方法應(yīng)該叫做one-step inactivation，一步缺失法。我之前做過，是用此方法缺失大腸桿菌中的基因，而且這基因位于質(zhì)粒上。lz篩不到陽性克隆，可能轉(zhuǎn)化效率低或者同源重組效率低。建議增加同源臂的長度（兩端大小應(yīng)差不多）、優(yōu)化電轉(zhuǎn)化條件、降低篩選平板上的新霉素濃度，或者干脆用自殺質(zhì)粒，效率比較高。 |
3樓2012-03-05 13:23:57
zhougang110
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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用過大腸桿菌基因敲除試劑盒，最適合長桿菌，如大腸、枯草。http://www.ruiyang-biotech.com/_d272408409.htm 自己去咨詢看看。 |
5樓2012-04-06 16:15:03
劉玉佩
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6樓2013-01-10 16:51:17
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