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lyl2ds銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助-基因克隆及引物設(shè)計(jì)的問題
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| 我現(xiàn)在想克隆出一段基因，需要設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，我又7條序列通過clustal比對(duì)找出了保守區(qū)，想將這保守區(qū)的全長(zhǎng)克隆出來，想請(qǐng)教下高人，幫我設(shè)計(jì)下簡(jiǎn)并引物！我是新手，請(qǐng)各位高人指教！ |
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2012-03-06 16:42:41, 15.85 K
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2樓2012-03-06 16:47:27
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5樓2012-03-11 19:16:52
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6樓2012-03-11 19:17:33
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助，歡迎常來 2012-06-08 13:52:00
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助，歡迎常來 2012-06-08 13:52:00
我們碰到的問題是一樣的，所用的方法也是一樣的，我要克隆的是某物種MHC的基因，您的第一步也是提取總的RNA和DNA吧，呵呵，我也在設(shè)計(jì)引物，準(zhǔn)備以總RNA中相應(yīng)的mRNA為模板RTPCR得到cDNA的第一條鏈，通過對(duì)7條其他物種MHC的mRNA的序列比對(duì)（用clustalx）找到了相對(duì)保守的序列，打算在5·端設(shè)計(jì)一個(gè)特異性引物，3·端先設(shè)計(jì)特異引物，不行就用Oligo（dT）；另一方面，根據(jù)文獻(xiàn)中給出的cDNA序列找到同源性較高的區(qū)段，重新設(shè)計(jì)引物，以總DNA為模板PCR，對(duì)擴(kuò)增出來的片段和DNA模板進(jìn)行測(cè)序。兩者比較可以找到相應(yīng)的外顯子和內(nèi)含子序列。我也是分子新手，不敢確定這樣做到底對(duì)不對(duì)，但還是希望能幫到您。 |
7樓2012-06-08 10:41:11
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