flyaway7585

樓: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-11 16:44:34:
是不是蛋白你要看OD260/OD280的值。
純的RNA量大的時(shí)候也會(huì)有肉眼可見的白色沉淀滴，我提RNA幾乎每次都有�？床坏匠恋韷K時(shí)得到的RNA量就很少，2、3微克左右的量就形不成沉淀塊了。

謝謝交流! 確實(shí)一般都可以看到少量沉淀，但是肝臟的沉淀有點(diǎn)多了，太多了。

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5樓2012-03-11 16:54:26

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西瓜

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5樓: Originally posted by flyaway7585 at 2012-03-11 16:54:26:
謝謝交流! 確實(shí)一般都可以看到少量沉淀，但是肝臟的沉淀有點(diǎn)多了，太多了。

那么在氯仿抽提的時(shí)候，上清取少一些，可以避免蛋白的污染。
其實(shí)一般來(lái)說(shuō)，RNA產(chǎn)量不是問(wèn)題，純度更重要，特別是肝臟這種RNA含量豐富的樣品。
1/3甚至1/4的上清就夠了。如果還是有蛋白，可以考慮用氯仿抽提2次，RNA豐富，不怕丟。

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6樓2012-03-11 17:50:16

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flyaway7585

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6樓: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-11 17:50:16:
那么在氯仿抽提的時(shí)候，上清取少一些，可以避免蛋白的污染。
其實(shí)一般來(lái)說(shuō)，RNA產(chǎn)量不是問(wèn)題，純度更重要，特別是肝臟這種RNA含量豐富的樣品。
1/3甚至1/4的上清就夠了。如果還是有蛋白，可以考慮用氯仿抽提2次 ...

ok,謝謝

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7樓2012-03-27 10:17:17

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sxxyxh

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★ ★ ★ ★
flyaway7585(金幣+1): 謝謝參與
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流問(wèn)題 2012-10-26 08:05:06

同樣的問(wèn)題
http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=4736603
http://www.dxy.cn/bbs/topic/2358 ... 2%E4%B8%99%E9%86%87

我昨天提RNA也遇到這個(gè)問(wèn)題，并且我們實(shí)驗(yàn)室之前也有人遇到這個(gè)問(wèn)題。

目前我的推測(cè)是：勻漿時(shí)組織加多了。原因：
1.我之前提的脾臟和頭腎組織RNA，效果非常好；偏偏提肝臟出這樣的問(wèn)題，我們實(shí)驗(yàn)室人出這問(wèn)題也是在肝臟組織。后來(lái)我發(fā)現(xiàn)，TaKaRa的RNAiso Plus提RNA，每g腦組織可提取1500μg RNA，每g煙草葉片可提取1000μg RNA，而每g肝臟組織可提高達(dá)5000μg的RNA。
2.測(cè)濃度時(shí)，OD280值并不大，且跑膠時(shí)膠孔未見蛋白殘留，說(shuō)明那一大坨白色物質(zhì)不太可能是蛋白。

另一個(gè)可能的原因是：乙醇未除干凈，因?yàn)镺D230較大，而鹽離子濃度影響RNA的溶解度。

另外我想問(wèn)問(wèn)樓主，加Trizol后勻漿離心后，上層是否漂有白白的顆粒狀東西？

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8樓2012-10-25 23:33:35

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