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chenyu05新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于SOD同工酶染色
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最近一直在做SOD同工酶電泳，對SOD同工酶的染色有諸多疑問，我采用的是NBT染色法，步驟如下： 1. 先將凝膠在黑暗中浸泡于2.45×10－3mol/LNBT溶液中20分鐘， 2.然后再將凝膠在黑暗中放入含有0.028mol/LTEMED,2.8×10-5mol/L核黃素，0.036mol/L PH7.8磷酸緩沖液中浸泡15分鐘， 3. 最后將凝膠浸泡在含有1×10－4mol/L EDTA的0.05mol/LPH7.8磷酸緩沖液中，用4000lx光照25－30分鐘 不知道是不是我的方法有問題，我最后得到的酶帶只有一條主帶。而且很不清晰，一照相就看不出來了。 請各位幫我看看是不是我的染色配方有問題？NBT溶液的濃度是不是太大了？ 另外能否幫忙那個推薦一下相關(guān)的英文文獻？找了好久都沒找到這樣的英文文獻。 非常感謝！ |
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sayaya
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵應(yīng)助 2012-04-17 13:38:50
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向你推薦 Francke 1979年發(fā)表于 PNAS 的方法： 1. 先將凝膠放入 50mM 磷酸緩沖液（pH7.8）中孵育10 分鐘，中途換液一次； 2. 浸泡于 1 mg/ml 的NBT溶液中孵育 10分鐘， 3 .然后再將凝膠在含有 3.25 mg/ml TEMED, 0.01 mg/ml 核黃素的 50 mM PH7.8磷酸緩沖液中浸泡10分鐘， 4. 在熒光下可見清晰的SOD活性區(qū)域。 |
2樓2012-04-17 09:48:32
kikijin1988
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3樓2013-06-18 13:18:33
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4樓2014-06-18 20:28:17
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本帖內(nèi)容被屏蔽 |
5樓2016-05-09 10:31:08
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