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liwanghua251

金蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 熒光PCR中，熒光閥值的問(wèn)題

我做相對(duì)定量，什么時(shí)候需要手動(dòng)設(shè)置閥值？
做了兩板PCR，怎么才能一起分析相對(duì)定量。例如，一個(gè)板子上是0h,12h,24h,36h。另一板上是0h,48h,60h,72h.想把他們同一起來(lái)比較，得出不同時(shí)間段的表達(dá)差異。
是否需要把兩板中的0h,的Ct值調(diào)成一致。

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1樓 2012-03-14 09:17:49

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andyzhengwp

金蟲(chóng) (小有名氣)

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liwanghua251: 金幣+1 2012-03-16 18:14:10

閾值是不用調(diào)的，機(jī)器自動(dòng)生成，一般只有一個(gè)峰，如果出現(xiàn)兩個(gè)峰有可能是引物二聚體，或者是加樣出現(xiàn)了問(wèn)題

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7樓2012-03-16 12:43:38

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西瓜

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小木蟲(chóng)(金幣+0.5): 給個(gè)紅包，謝謝回帖
liwanghua251(金幣+1): 2012-03-15 09:05:59
1949stone: 金幣+1, 鼓勵(lì) 2012-03-15 09:58:29

不用調(diào)閾值的，調(diào)了也沒(méi)意義。閾值雖然能影響CT值，但是不能影響Ct值的差異（前提是閾值設(shè)置在合理范圍）。
你兩個(gè)板的不同時(shí)間點(diǎn)的樣品分別和同一個(gè)板上的0h比較，兩個(gè)板的結(jié)果可以放在一起，不過(guò)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)淖龇☉?yīng)該是所有樣品都在同一個(gè)板上跑。

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2樓2012-03-14 22:43:50

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liwanghua251

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引用回帖:

樓: Originally posted by 西瓜 at 2012-03-14 22:43:50:
不用調(diào)閾值的，調(diào)了也沒(méi)意義。閾值雖然能影響CT值，但是不能影響Ct值的差異（前提是閾值設(shè)置在合理范圍）。
你兩個(gè)板的不同時(shí)間點(diǎn)的樣品分別和同一個(gè)板上的0h比較，兩個(gè)板的結(jié)果可以放在一起，不過(guò)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)淖龇☉?yīng)該 ...

我也知道嚴(yán)謹(jǐn)?shù)淖龇ǎ菍?shí)在是沒(méi)法放在一起。是不是說(shuō)一般的閥值都不用改，按照機(jī)器給的就可以了嗎？
還有個(gè)問(wèn)題就是，陰性對(duì)照的作用是什么？我做的陰性對(duì)照也有峰怎么回事？

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3樓2012-03-15 09:05:48

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小貓三兩只

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liwanghua251: 金幣+1 2012-03-16 12:21:05

引用回帖:

3樓: Originally posted by liwanghua251 at 2012-03-15 09:05:48:
我也知道嚴(yán)謹(jǐn)?shù)淖龇�，但是�?shí)在是沒(méi)法放在一起。是不是說(shuō)一般的閥值都不用改，按照機(jī)器給的就可以了嗎？
還有個(gè)問(wèn)題就是，陰性對(duì)照的作用是什么？我做的陰性對(duì)照也有峰怎么回事？

一般做熒光定量的話都不用調(diào)閥值的，按機(jī)器默認(rèn)的就行。陰性對(duì)照有峰說(shuō)明你的體系可能有污染

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4樓2012-03-15 17:49:10

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