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jingzixy新蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于細菌細胞壁、細胞膜的染色
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| 想想大家請教一下細菌的細胞壁、細胞膜的染色問題，細菌細胞壁、細胞膜染色都有那些方法？革蘭氏陽性菌細胞膜染色有人做過嗎？ |
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zdx516
鐵蟲 (小有名氣)
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細菌細胞壁染色 一、基本原理 細菌細胞壁很薄，革蘭氏陽性菌的細胞壁為20—30nm，革蘭氏陰性菌的細胞壁為10—13nm。組成細菌細胞壁的主要化學成分是肽聚糖，它與染料結(jié)合的能力差，不易著色，在細菌的染色過程中，一般情況染料都是通過細胞壁的滲透、擴散等作用而進入細胞，細胞壁本身并未染色，因此，欲通過染色來觀察細胞壁，必須設(shè)法使細胞壁能著色，而細胞質(zhì)則不易著色，常用的方法有單寧酸法和磷鉬酸法。單寧酸和磷鉬酸都是起媒染作用，它們使細胞壁形成可著色的復合物，而使細胞質(zhì)不易被著色，經(jīng)結(jié)晶紫或甲基綠染色后，便可在普通光學顯微鏡下觀察到細胞壁。 根據(jù)細菌細胞在高滲溶液中或用乙醚蒸氣處理后，會產(chǎn)生質(zhì)壁分離這一現(xiàn)象，經(jīng)染色后也可在普通光學顯微鏡下區(qū)分細胞壁和細胞質(zhì)膜。 二、器材 巨大芽孢桿菌（Bacillus megatherium），枯草芽孢桿菌； 0．2％結(jié)晶紫水溶液，5％單寧酸（鞣酸）水溶液，1％磷鉬酸水溶液，1％甲基綠水溶液，25％NaCl水溶液，0．01％結(jié)晶紫水溶液，Bouin氏固定液，0．1％硫堇（thionine）水溶液，乙醚，乙醚蒸氣瓶等。 三、操作步驟 1．單寧酸法 (1)將培養(yǎng)16—18小時的巨大芽孢桿菌按常法制成涂片。 (2)用5％單寧酸染5分鐘后，水洗。 (3)用0．2％結(jié)晶紫染3—5分鐘，水洗，吹干。用油鏡觀察，細胞壁呈紫色，細胞質(zhì)呈淡紫色。 2．磷鉬酸法 (1)制備濃厚的涂片，在未干時浸入1％磷鉬酸水溶液3—5分鐘。 (2)用1％甲基綠水溶液染3—5分鐘。 (3)水洗后，吹干，用油鏡觀察。細胞壁為綠色，細胞質(zhì)無色。 |
2樓2012-03-21 16:09:29
jingzixy
新蟲 (小有名氣)
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3樓2012-03-22 19:56:10
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