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jingzixy新蟲(chóng) (小有名氣)
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關(guān)于細(xì)菌細(xì)胞壁、細(xì)胞膜的染色
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| 想想大家請(qǐng)教一下細(xì)菌的細(xì)胞壁、細(xì)胞膜的染色問(wèn)題,細(xì)菌細(xì)胞壁、細(xì)胞膜染色都有那些方法?革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞膜染色有人做過(guò)嗎? |
鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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細(xì)菌細(xì)胞壁染色 一、基本原理 細(xì)菌細(xì)胞壁很薄,革蘭氏陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁為20—30nm,革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁為10—13nm。組成細(xì)菌細(xì)胞壁的主要化學(xué)成分是肽聚糖,它與染料結(jié)合的能力差,不易著色,在細(xì)菌的染色過(guò)程中,一般情況染料都是通過(guò)細(xì)胞壁的滲透、擴(kuò)散等作用而進(jìn)入細(xì)胞,細(xì)胞壁本身并未染色,因此,欲通過(guò)染色來(lái)觀察細(xì)胞壁,必須設(shè)法使細(xì)胞壁能著色,而細(xì)胞質(zhì)則不易著色,常用的方法有單寧酸法和磷鉬酸法。單寧酸和磷鉬酸都是起媒染作用,它們使細(xì)胞壁形成可著色的復(fù)合物,而使細(xì)胞質(zhì)不易被著色,經(jīng)結(jié)晶紫或甲基綠染色后,便可在普通光學(xué)顯微鏡下觀察到細(xì)胞壁。 根據(jù)細(xì)菌細(xì)胞在高滲溶液中或用乙醚蒸氣處理后,會(huì)產(chǎn)生質(zhì)壁分離這一現(xiàn)象,經(jīng)染色后也可在普通光學(xué)顯微鏡下區(qū)分細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)膜。 二、器材 巨大芽孢桿菌(Bacillus megatherium),枯草芽孢桿菌; 0.2%結(jié)晶紫水溶液,5%單寧酸(鞣酸)水溶液,1%磷鉬酸水溶液,1%甲基綠水溶液,25%NaCl水溶液,0.01%結(jié)晶紫水溶液,Bouin氏固定液,0.1%硫堇(thionine)水溶液,乙醚,乙醚蒸氣瓶等。 三、操作步驟 1.單寧酸法 (1)將培養(yǎng)16—18小時(shí)的巨大芽孢桿菌按常法制成涂片。 (2)用5%單寧酸染5分鐘后,水洗。 (3)用0.2%結(jié)晶紫染3—5分鐘,水洗,吹干。用油鏡觀察,細(xì)胞壁呈紫色,細(xì)胞質(zhì)呈淡紫色。 2.磷鉬酸法 (1)制備濃厚的涂片,在未干時(shí)浸入1%磷鉬酸水溶液3—5分鐘。 (2)用1%甲基綠水溶液染3—5分鐘。 (3)水洗后,吹干,用油鏡觀察。細(xì)胞壁為綠色,細(xì)胞質(zhì)無(wú)色。 |
新蟲(chóng) (小有名氣)
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