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jingzixy新蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于細(xì)菌細(xì)胞壁、細(xì)胞膜的染色
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| 想想大家請(qǐng)教一下細(xì)菌的細(xì)胞壁、細(xì)胞膜的染色問(wèn)題，細(xì)菌細(xì)胞壁、細(xì)胞膜染色都有那些方法？革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞膜染色有人做過(guò)嗎？ |
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zdx516
鐵蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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zhang8826857: 金幣+4, good 2012-03-22 22:20:48
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細(xì)菌細(xì)胞壁染色 一、基本原理 細(xì)菌細(xì)胞壁很薄，革蘭氏陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁為20—30nm，革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁為10—13nm。組成細(xì)菌細(xì)胞壁的主要化學(xué)成分是肽聚糖，它與染料結(jié)合的能力差，不易著色，在細(xì)菌的染色過(guò)程中，一般情況染料都是通過(guò)細(xì)胞壁的滲透、擴(kuò)散等作用而進(jìn)入細(xì)胞，細(xì)胞壁本身并未染色，因此，欲通過(guò)染色來(lái)觀察細(xì)胞壁，必須設(shè)法使細(xì)胞壁能著色，而細(xì)胞質(zhì)則不易著色，常用的方法有單寧酸法和磷鉬酸法。單寧酸和磷鉬酸都是起媒染作用，它們使細(xì)胞壁形成可著色的復(fù)合物，而使細(xì)胞質(zhì)不易被著色，經(jīng)結(jié)晶紫或甲基綠染色后，便可在普通光學(xué)顯微鏡下觀察到細(xì)胞壁。 根據(jù)細(xì)菌細(xì)胞在高滲溶液中或用乙醚蒸氣處理后，會(huì)產(chǎn)生質(zhì)壁分離這一現(xiàn)象，經(jīng)染色后也可在普通光學(xué)顯微鏡下區(qū)分細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)膜。 二、器材 巨大芽孢桿菌（Bacillus megatherium），枯草芽孢桿菌； 0．2％結(jié)晶紫水溶液，5％單寧酸（鞣酸）水溶液，1％磷鉬酸水溶液，1％甲基綠水溶液，25％NaCl水溶液，0．01％結(jié)晶紫水溶液，Bouin氏固定液，0．1％硫堇（thionine）水溶液，乙醚，乙醚蒸氣瓶等。 三、操作步驟 1．單寧酸法 (1)將培養(yǎng)16—18小時(shí)的巨大芽孢桿菌按常法制成涂片。 (2)用5％單寧酸染5分鐘后，水洗。 (3)用0．2％結(jié)晶紫染3—5分鐘，水洗，吹干。用油鏡觀察，細(xì)胞壁呈紫色，細(xì)胞質(zhì)呈淡紫色。 2．磷鉬酸法 (1)制備濃厚的涂片，在未干時(shí)浸入1％磷鉬酸水溶液3—5分鐘。 (2)用1％甲基綠水溶液染3—5分鐘。 (3)水洗后，吹干，用油鏡觀察。細(xì)胞壁為綠色，細(xì)胞質(zhì)無(wú)色。 |
2樓2012-03-21 16:09:29
jingzixy
新蟲 (小有名氣)
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3樓2012-03-22 19:56:10
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