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若然飛翔新蟲 (初入文壇)
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[求助]
利用CHO進(jìn)行分泌表達(dá)
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| Sample Text 我想利用CHO細(xì)胞分泌表達(dá)一個(gè)膜蛋白，從上游構(gòu)建開始，我該如何選擇可以在CHO中進(jìn)行高效表達(dá)的載體?如果使用pCDNA3.1,啟動(dòng)子，增強(qiáng)子我該如何處理？如何選擇信號(hào)肽��？剛開始接觸，有太多不明白的地方了，請大家?guī)蛶兔?img src="https://muchongimg.xmcimg.com/data/emuch_bbs_images/smilies/dragon/19.gif" align="absmiddle" border="0"> |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
若然飛翔: 金幣+5, ★有幫助 2012-03-22 21:27:48
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我得理解：你只是想把該膜蛋白的胞外區(qū)分泌表達(dá)到培養(yǎng)基中，而不是表達(dá)完整的膜蛋白，對嗎？ 如果是這樣，你可以用pCDNA3.1，沒問題，只是表達(dá)量可能比較低。 比較經(jīng)典的瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)有兩個(gè)，這兩個(gè)瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)都是有質(zhì)粒的擴(kuò)增系統(tǒng)，因而表達(dá)量比較高： 1）HEK293E +含有EBV ori 的質(zhì)粒 2）HEK293 T or HEK293FT +含有SV40 ori的質(zhì)粒 |
8樓2012-03-21 22:26:15
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【答案】應(yīng)助回帖
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首先，完整的膜蛋白是不可能分泌表達(dá)的（你是指將膜蛋白表達(dá)在CHO細(xì)胞的細(xì)胞膜上吧？）。既然是膜蛋白，就用它自身的信號(hào)肽就好了。 表達(dá)時(shí)載體的確很重要，但也得分情況的: 如果你是想構(gòu)建穩(wěn)定的細(xì)胞株，那么你可以考慮用pcDNA3.1，也可以考慮用invitrogen的FlP-IN系統(tǒng)，更容易獲得高表達(dá)細(xì)胞株； 如果是做瞬時(shí)表達(dá)，那么建議你用invitrogen的MembranePro™ Functional Protein Expression (FPE) System。 |
2樓2012-03-19 21:36:01
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4樓2012-03-21 08:01:57
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