 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1896 | 回復(fù): 5 | |||
| 本帖產(chǎn)生 2 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | |||
zhnchn銅蟲 (初入文壇)
|
[求助]
PCR標(biāo)準(zhǔn)體系有關(guān)問題。。求高手解答
|
||
|
標(biāo)準(zhǔn)的PCR反應(yīng)體系： 10×擴(kuò)增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加雙或三蒸水至 100ul 其中10×擴(kuò)增緩沖液是什么意思啊 前面怎么乘以10了， 4種dNTP混合物 各 200umol/L 這個(gè)200umol/L 不是濃度單位嘛？ 怎么配標(biāo)準(zhǔn)體系最后沒有需要多少體積的該混合物 且引物的量不是定的嗎？pmol是怎么換算成體積單位的�。� Taq DNA聚合酶 2.5u 這個(gè)單位求解釋的��？ 不懂的唉 Mg2+ 1.5mmol/L 這個(gè)用量也不懂的。。。 問下大家配體系的時(shí)候是不是都換成體積單位進(jìn)行試劑配置的 我自己做的PCR,體系所加試劑單位都是體積 剛看到這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)體系 不懂的唉 求高手解答 問的低級(jí)問題 請(qǐng)勿噴哦。。。 謝謝 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有186人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- PCR引物的量如何確定，求助高手指教
已經(jīng)有11人回復(fù)
- pcr過程中遇到的詭異現(xiàn)象，求高手解釋一下
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 求高手幫我分析下 PCR 實(shí)驗(yàn)電泳圖，怎么改善�。�！
已經(jīng)有6人回復(fù)
- PCR高手請(qǐng)進(jìn)，小女子有事相求，我剛來金幣不要嫌少啊，我只有這么多啊，全給你了
已經(jīng)有20人回復(fù)
- 向RTPCR高手求助，關(guān)于RTPCR的空白對(duì)照問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR沒有結(jié)果，希望高手指教
已經(jīng)有29人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于熒光定量PCR的小問題,請(qǐng)高手指點(diǎn) 【問題已解決】
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】有關(guān)qRT-PCR的問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】有關(guān)菌液PCR的問題
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】從RNA到cDNA合成再到克隆PCR的實(shí)驗(yàn)技巧和操作細(xì)節(jié)問題若干，尋求解答
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【求助/交流】求教PCR高手
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】Real time RT-PCR 引物設(shè)計(jì)問題（高懸賞請(qǐng)高手幫忙）
已經(jīng)有28人回復(fù)
bbwalkman
木蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 6
- 應(yīng)助: 43 (小學(xué)生)
- 金幣: 2334.5
- 紅花: 3
- 帖子: 240
- 在線: 171.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1279904
- 注冊(cè): 2011-04-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 生化分析及生物傳感
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, good！ 2012-03-27 11:33:32
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, good！ 2012-03-27 11:33:32
|
1.10×的Buffer是酶的反應(yīng)緩沖，是以十倍量保存，反應(yīng)時(shí)要變成1×，所以100ul 體系里加了 10ul 2.dNTP一般是2.5mM的包裝，你買的什么的都會(huì)有說明，所以根據(jù)你加的濃度換算成體積 3.引物是自己合成的鏈，這個(gè)根據(jù)你的體系加，還有你當(dāng)初溶鏈時(shí)的濃度，然后根據(jù)你加的濃度換算體積，這個(gè)一般是過量的 4.酶量的確定可根據(jù)你聚合酶的說明書來定，U指的是Unit，就是每ul里有多少單位，根據(jù)你酶的活性加入相應(yīng)的體積 5.Mg2+一般不用單獨(dú)加，反應(yīng)Buffer里面有，但是可能這個(gè)反應(yīng)體系需要自己加吧 6.關(guān)于體積問題都要根據(jù)你儲(chǔ)備液的濃度以及相應(yīng)你要用的終濃度來換算的 |
2樓2012-03-27 10:26:13
atlanticwi
金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應(yīng)助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線: 313.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 1099992
- 注冊(cè): 2010-09-15
- 專業(yè): 植物生理與生化
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 還是很熱心哈 2012-03-27 11:35:31
zhnchn: 金幣+1, ★★★很有幫助, 謝謝 有不懂的 再請(qǐng)教你 2012-03-28 00:23:57
西瓜: 金幣+2, MolEPI+1, 每次回帖都很認(rèn)真耐心 2012-04-01 17:14:00
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 還是很熱心哈 2012-03-27 11:35:31
zhnchn: 金幣+1, ★★★很有幫助, 謝謝 有不懂的 再請(qǐng)教你 2012-03-28 00:23:57
西瓜: 金幣+2, MolEPI+1, 每次回帖都很認(rèn)真耐心 2012-04-01 17:14:00
|
嗯......木有人噴你了，大家都是這個(gè)階段過來的啦 1. 10X的意思是10倍濃縮儲(chǔ)存液，工作液是一般是1X的，所以你總體系如果用100uL，就會(huì)用10uL的緩沖液，最后不是稀釋了10倍嘛~ 2. 4種dNTP混合物，是濃度標(biāo)定的呀，我們一般PCR使用2.5uM（也就是2.5umol/L，但我這里指的是混好的，不是你這種分開放的)，用2~3uL就夠了（針對(duì)20uL體系）所以你可以計(jì)算一下，以放大或縮小你需要加的量 3. 引物的量當(dāng)然是定的了，你訂來的引物需要加水溶解至儲(chǔ)存液（我們用100uM），然后稀釋至工作液（我們一般PCR用10uM），20uL的體系加1uL就夠了，你可以算一下是不是在這個(gè)引物給定范圍內(nèi)。 4. 酶都是按活力單位U給的，不過也有給你每uL多少U的，你換算成體積（uL）就成了哦 5. Mg離子一般緩沖液會(huì)含有的，但是某些公司就是分開裝的，所以遇到這種情況，你把它按你總體系多少換算過來需要多少uL Mg離子量 6. 所以配PCR體系都是按照體積加的哦~~~~~~ 如有寫錯(cuò)，希望高手指正，祝實(shí)驗(yàn)順利  |
3樓2012-03-27 10:26:41
wubinsean
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 58.3
- 帖子: 122
- 在線: 37.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 1556095
- 注冊(cè): 2011-12-29
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2012-03-31 19:50:03
不倒帆
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 35
- 帖子: 12
- 在線: 8小時(shí)
- 蟲號(hào): 1867524
- 注冊(cè): 2012-06-23
- 專業(yè): 生物化學(xué)
5樓2012-08-22 15:01:52
藥界小蟲
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 187.7
- 帖子: 44
- 在線: 13.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 3434638
- 注冊(cè): 2014-09-22
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
6樓2022-04-12 15:16:56
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 zhnchn 的主題更新
| 6 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 070300化學(xué)319求調(diào)劑 +4 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 化學(xué)工程321分求調(diào)劑 +11 | 大米飯！ 2026-03-15 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑0856材料化工 +13 | z2839474511 2026-03-11 | 14/700 |
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八旬速覽 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +6 | 步川酷紫123 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 267一志愿南京工業(yè)大學(xué)0817化工求調(diào)劑 +6 | SUICHILD 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 東南大學(xué)364求調(diào)劑 +5 | JasonYuiui 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +6 | 太想進(jìn)步了0608 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600調(diào)劑 +5 | 漾漾123sun 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 東華理工大學(xué)化材專業(yè)26屆碩士博士申請(qǐng) +6 | zlingli 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +4 | 奇點(diǎn)0314 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +4 | 威化餅07 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | 快樂的香蕉 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | Mochaaaa 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工085600調(diào)劑求老師收留 +9 | jiaanl 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 芬達(dá)46 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 工科調(diào)劑 +4 | Jiang191123！ 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化工學(xué)碩306求調(diào)劑 +9 | 42838695 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考博] 福州大學(xué)楊黃浩課題組招收2026年專業(yè)學(xué)位博士研究生，2026.03.20截止 +3 | Xiangyu_ou 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-12 | 4/200 |
|