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含羞草liu新蟲 (小有名氣)
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[求助]
昆蟲觸角總RNA提取疑問
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我現(xiàn)在在提取蛾子觸角的總RNA，采用的試劑是Trizol，提取后電泳檢測，結(jié)果都是只有一條帶，大概在900bp左右，已反復(fù)試驗(yàn)幾次，得到的結(jié)果都是一樣的，只有一條帶900bp左右。電泳圖見附圖1. 為了驗(yàn)證我提取的產(chǎn)物是否為DNA，我同時(shí)提取了總DNA，電泳后發(fā)現(xiàn)有兩條帶，一條在2000bp以上，一條在在900bp左右。電泳圖見附圖2. 后來，我又用了柱式動(dòng)物組織總RNA提取純化試劑盒，按說明書的操作進(jìn)行，最后提取的產(chǎn)物跑膠后也只有一條帶，大小在2000bp以上，與總DNA電泳的上層條帶大致位置相同。見圖3. 根據(jù)得到的結(jié)果推測，兩種RNA提取方法，可能只是提取出特定大小的基因組DNA。但我不明白，為什么按提RNA的方法只能提出DNA，還只有這特定的大�。縍NA又在哪呢？ 注：在提取的過程中，為了使裂解更充分，我用Trizol處理的時(shí)間為冰上靜置半小時(shí)。為了使RNA沉淀更充分，我加異丙醇后，30℃溫育30min。加氯仿后吸取的上清液是透明的，但異丙醇沉淀后就出現(xiàn)了黑色的雜質(zhì)，看不到白色的RNA沉淀。 不明白是什么原因。 請有經(jīng)驗(yàn)的幫忙分析一下，感激不盡！��！ 圖1 圖2 圖3 |
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| 我沒有單獨(dú)提取觸角，但是經(jīng)常提取小菜蛾幼蟲的RNA，沒有出現(xiàn)過以上現(xiàn)象，只是28s:18s差不多1:2。我個(gè)人認(rèn)為你說“為了沉淀更充分，加異丙醇后，30℃溫育30min”時(shí)間太久了吧，而且還是30°，我們實(shí)驗(yàn)室一般都是常溫10min，RNA提取過程本來都要相對快速的，所以我覺得這步不大合理。個(gè)人意見~ |
4樓2012-03-31 14:10:53
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我提過蛾子的RNA，不過沒出現(xiàn)過1條帶的時(shí)候，看Marker的電泳情況，帶應(yīng)該跑的很開了，不會(huì)出現(xiàn)聚在一起的情況。你的DNA條帶跑的倒是挺像RNA的 ，不必看提取的RNA分子量的，沒有意義。實(shí)際上表明上也是為了看提取的28S和18S的情況，來估計(jì)總RNA的情況。樓主的情況不于重復(fù)提取，應(yīng)該仔細(xì)思考每個(gè)提取過程，從材料收集、保存、研磨是否充分等等，最重要的是預(yù)防RNA酶，這個(gè)最重要了。祝實(shí)驗(yàn)找到問題所在，加油！ |
6樓2012-04-01 20:31:53
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